细胞(xìbāo)转染技术第一页，共二十一页。一：转染的简介(jiǎnjiè)二：转染的分类三：转染的方法第二页，共二十一页。1.基因转染:将具生物功能的核酸转移(zhuǎnyí)或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能。2.基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究和基因治疗研究。第三页，共二十一页。瞬时转染稳定转染目的快速分析为获得稳定表达外源基因的单细胞克隆目的DNA与宿主染色体未整合整合表达持续时间随细胞分裂而稀释至丢失48－72小时随宿主细胞本身基因组一样复制，转录，翻译，并被稳定遗传筛选办法抗生素抗性抗生素抗性第四页，共二十一页。转染方法化学转染法物理转染法病毒感染法DEAE一葡聚糖法显微注射法逆转录病毒磷酸钙法电穿孔法腺病毒人工脂质体法基因枪法第五页，共二十一页。是最早应用哺乳动物(bǔrǔdòngwù)细胞转染的试剂之一。DEAE-葡聚糖是阳离子多聚体,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取。DEAE一葡聚糖转染已成功地应用于瞬时开始，但用于稳定转染却不可靠。第六页，共二十一页。由于试剂易得、价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定染的研究(yánjiū)。方法是，先将DNA和氯化钙混合，然后加人到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过胞膜的内吞作用摄人DNA。第七页，共二十一页。原理：阳离子脂质体试剂与DNA混合后，形成(xíngchéng)一种稳定的脂质双层复合物，DNA被包在脂质体中间，这种脂质双层复合物可直接加到培养的细胞中，脂质体粘附到细胞表面并与细胞膜融合，DNA被释放到胞浆中。第八页，共二十一页。此图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般(yībān)过程。第九页，共二十一页。【主要应用(yìngyòng)】:瞬时转染稳定转染.【特点】：使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，很大程度上应用受限制。第十页，共二十一页。利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸索(mōsuǒ)的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。第十一页，共二十一页。（1）电穿孔法利用高压电脉冲对细胞膜的干扰，使其形成利于核酸进人的微孔。电穿孔...
