2022年医学专题—移植前检测HLA和ABO血型配型(1).ppt

,第二十八章 移植(yzh)免疫及其免疫检测,第一页，共五十八页。,移植（transplantation）:将健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能(gngnng)的现代医疗手段。移植物（graft）供 体（donor）受 体（recipient）或宿主（host）,概 述,第二页，共五十八页。,自体移植根据移植物来源 同系移植 同种异体移植 异种(y zhn)移植 原位移植根据移植部位 异位移植 器官移植移植物种类 支架组织移植 细胞移植,移植(yzh)的类型,第三页，共五十八页。,组织器官移植种类(zhngli)和命名,移植名称 供者、受者关系 举例 自体移植 同一个体 自体断肢(dun zh)再植，自体皮片移植 同系或同基因移植 同系或同基因 人的单卵双生子间的器官移植 的个体间 同品系小鼠的皮片移植 同种异基因移植 同种不同基因 人与人之间的肾移植 的个体间 不同品系小鼠间的皮片移植 异种移植 异种动物间 狗的器官移植给猩猩 猪的器官移植给狗,第四页，共五十八页。,第一节 引起(ynq)排斥反应的靶抗原,第五页，共五十八页。,1 主要组织相容性抗原(kngyun)人 HLA 鼠 H-2遗传特征：单倍型遗传高度多态性2 次要组织相容性抗原,主要组织相容性抗原(kngyun)（MHC分子）,第六页，共五十八页。,父 母 HLA是人体多态性最丰富的基因(jyn)系统。据1999年的统计，HLA复合物等位基因(jyn)总数已达到1031个，其中HLA-B等位基因(jyn)有301个,A9Cw3B7,A2Cw2B13,A1Cw1B5,A3Cw4B8,HLA的遗传(ychun)特征,第七页，共五十八页。,第二节 排斥(pich)反应的种类及发生机制,第八页，共五十八页。,移植排斥(pich)反应（transplantation rejection）,针对移植抗原产生免疫应答，从而导致移植物功能丧失或受者机体损害(snhi)的过程。,分类：超急性排斥反应(fnyng)急性排斥反应 慢性排斥反应,第九页，共五十八页。,机制：受者体内存有抗供者移植物的预存抗体，与抗原结合，激活补体和凝血系统,导致血管内凝血。预存抗体来源：1、供受者之间ABO 血型不合；2、受者反复多次输血、妊娠或既往作过移植(yzh)。处理：重新移植预防：ABO血型配型、细胞毒实验,1.超急性(jxng)排斥反应,第十页，共五十八页。,2.急性排斥(pich)反应,体液性排斥 抗体激活补体，并有CD4+T 细胞参与，导致急性血管炎细胞性排斥 CD8+CTL细胞的细胞毒作用、CD4+T和巨噬细胞的作用，导致急性间质炎。处理 使用(shyng)免疫抑制剂,第十一页，共五十八页。,在急性(jxng)排斥反应中的两条抗原提呈途径：直接途径（direct path）:残留于供者移植物内的抗原提呈细胞（过客细胞）对受者机体的免疫系统提供最初的抗原刺激。这种抗原性刺激，来自移植物中树突状细胞和单核细胞等表面富含的HLA-、-类分子 间接途径（indirect path）:通过受者体内的抗原提呈细胞对具有同种异基因HLA-、-类分子的移植物实质细胞的识别。无论是供者还是受者，其抗原提呈细胞提供的IL-1、IL-6等刺激信号，有助于触发淋巴细胞的活化,第十二页，共五十八页。,同种移植排斥反应(fnyng)的发生机制,第十三页，共五十八页。,慢性排斥反应的介导因素：T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。B细胞产生的抗体活化补体或通过ADCC破坏血管内皮细胞。急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变，此与细胞 和体液免疫均有关系。非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。受者患有高血压或糖尿病也可促使慢性排斥反应的发生临床特征：对免疫抑制疗法不敏感无特异性治疗方法，最终需要重新(chngxn)进行器官移植,3.慢性排斥(pich)反应,第十四页，共五十八页。,定义：在骨髓移植时，供者骨髓中的免疫细胞启动以受者细胞为靶抗原的免疫应答反应，引起攻击(gngj)受者的移植物抗宿主反应。GVHD也可见于脾、胸腺和小肠移植。发生机制：T细胞起主要作用 IL-2、IL-6、TNF-、IFN-等 ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等,4.移植物抗宿主(szh)反应,第十五页，共五十八页。,第三(d sn)节 HLA分型方法,第十六页，共五十八页。,血清学分型法,应用一系列已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合(hnh)，借助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。,操作简便易行、节约试剂、结果(ji gu)可靠、重复性好 无需特殊设备,优点(yudin),缺点,耗时长不同批号抗血清结果常有不同,第十七页，共五十八页。,用于HLA分型的微量细胞毒试验(shyn),第十八页，共五十八页。,血清学分型法,第十九页，共五十八页。,第二十页，共五十八页。,细胞学分型法,以混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture,MLC）或称混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）为基本技术的HLA分型法。能用本法测定(cdng)的抗原称为LD抗原（lymphocyte defined antigen）,包括HLA-D、-DP。,1.单向(dn xin)MLC,原理：将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处理，使其失去增殖能力仅作为(zuwi)刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用3H-TdR掺入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的HLA型别。,根据选用的刺激细胞类型分为：,1阴性分型法,2阳性分型法,第二十一页，共五十八页。,遗传型不同的两个个体(gt)淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向MLC。在此试验中，各自的淋巴细胞既是刺激细胞，又是反应细胞，反应后形态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过形态法计数转化细胞。,2.双向MLC,第二十二页，共五十八页。,分子生物学分型法,限制性片断长度(chngd)多态性（restriction fragment length polymorphism,RFLP）分析：最早建立的研究HLA多态性的DNA分型技术 PCR-RFLP分型法：对DNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加,1.RFLP与PCR-RFLP分型法,第二十三页，共五十八页。,序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequence specific oligonucleotide,PCR-SSO）是以PCR为基础，将凝胶上扩增的HLA基因DNA转移至硝酸纤维膜或尼龙膜，进而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之进行(jnxng)杂交，从而对扩增产物作出HLA型别判断。分类：斑点或印渍法：用扩增的待测DNA印渍或点至固相支持物，再与探针行杂交，利于大量标本分型反向斑点或印渍法：将已知DNA印渍或点至固相支持物，然后与扩增的待测DNA（预先标记）杂交，用于少量标本分型 PCR-SSO是类HLA分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的HLA-DR、DQ、DP等位基因,2.PCR-SSO分型法,第二十四页，共五十八页。,基因芯片(gene chip)是近年发展起来的一项新技术,将其与PCR-SSO结合应用于HLA分型，可使分型趋于规模化和自动化，尤其在HLA多态性和疾病遗传背景分析等方面更具优势。HLA的基因芯片分型法，实际上是PCR-SSO反向斑点或印渍法的微型化。目前，基因芯片在HLA分型领域(ln y)的应用尚属起步阶段。,2.PCR-SSO分型法,第二十五页，共五十八页。,原理：应用设计的一套HLA等位基因的序列特异性引物（sequence specific primer,SSP）,对待测DNA进行PCR扩增，从而获得(hud)HLA型别特异性的扩增产物HLA基因扩增的特异性包括：座位特异性（locus-specific），如HLA-A、B、-DRB1等；组特异性（group-specific），如DRB1-01、DRB1-02等；等位基因特异性（allele-specific），如DRB1*0401、DRB1*0402等。,3.PCR-SSP分型法,第二十六页，共五十八页。,单链构象(u xin)特异性聚合酶链反应（PCR-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP）是以对待测基因PCR扩增为基础，对扩增的单链DNA（ssDNA）的HLA分型方法。原理：对ssDNA进行无变性剂的聚丙烯酰凝胶电泳时，因其序列的差异可形成不同的空间构象而导致电泳迁移率的差异，如此可分辨出单一碱基的差异和检测出DNA多态性或点突变，有助于新的HLA等位基因或突变体的发现。特点：PCR-SSCP作为PCR-SSO的补充，在区分纯合子和杂合子基因方面有其独到之处，有利于排除SSO杂交的假性。,4.PCR-SSCP分型法,第二十七页，共五十八页。,基于序列的HLA分型法（sequence-based HLA typing,SBT），通过对扩增后的HLA基因片段通过核酸序列测定来判断HLA型别。基本(jbn)过程：分离待测细胞的DNA，应用座位、组或等位基因特异性引物进行PCR扩增，扩增产物的纯化和测序，测出的基因序列与HLA基因库的DNA已知序列比较，判断待测的HLA型别。,5.SBT分型法,第二十八页，共五十八页。,第四节 常见(chn jin)的组织或器官移植,第二十九页，共五十八页。,肾脏(shnzng)移植,肾脏(shnzng)移植，创始于1950年，是临床开展最早、应用最多和效果最佳的一种器官移植。,1.组织(zzh)配型在肾脏移植中的应用,组织配型是肾脏移植前选择供者的重要手段 ABO血型配型、HLA配型和 交叉配型肾源选择的原则 以ABO血型完全相同者为好，至少能够相容 选择最佳HLA配型的供者器官,第三十页，共五十八页。,2.肾移植受者的疗效(lioxio)检测,疗效监测：受者免疫状态检测临床观测项目:T细胞总数、CD4/CD8比值和IL-2及其受体的检测，判断排斥(pich)反 应的发生和评估免疫抑制剂治疗效果 肾组织活检，预测排斥反应的发生 CsA血药浓度检测，指导合理用药，减少肾毒性,第三十一页，共五十八页。,肝脏(gnzng)移植,特点：HLA是否匹配与肝脏移植效果无显著差异机制：肝脏移植时，因HLA不配仅发生较弱的排斥(pich)反应，而免疫抑制剂 的应用有效控制了排斥(pich)反应的发生肝脏移植时仍应尽可能进行HLA配型,1.组织(zzh)配型在肝脏移植中的应用,第三十二页，共五十八页。,组织病理学特点：肝移植术后第2天，汇管区出现明显的白细胞浸润，汇管区和肝窦的白细胞浸润第7天达高峰，涉及到T细胞、B细胞、巨噬细胞、嗜酸性和中性粒细胞。在浸润的T细胞中CD8+细胞高于CD4+细胞，也见有IL-2R和CD25+的活化T细胞。排斥反应发生(fshng)几率：约2/3的肝移植患者出现过排斥反应的病理学改变，也有8的病例术后发生急、慢性排斥反应，占肝移植致死原因的10%。,2.肝移植受者的疗效(lioxio)检测,第三十三页，共五十八页。,心脏移植与心肺(xn fi)联合移植,ABO血型匹配：避免急性排斥反应的首要条件HLA I、类分子匹配：移植(yzh)器官长期存活的重要因素。淋巴细胞毒交叉配合和群体反应性抗体检测,1.组织(zzh)配型在心脏和心肺联合移植中的应用,第三十四页，共五十八页。,免疫监测指标：外周血淋巴细胞总数 T、B细胞的转化能力 T细胞亚类百分数及比值 CTL细胞毒作用 细胞因子及其受体表达或转录(zhun l)水平 转化生长因子 NK细胞数及