2022年医学专题—月季花药培养(1).ppt

1、被子植物定义：凡是种子(zhng zi)有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物,一、被子植物(biz-zhw)和裸子植物,2、裸子植物定义：凡是胚珠裸露，外面(wimin)没有子房壁包被，种子外面(wimin)没有果皮包被的植物称为裸子植物,实例：玉米、大豆、梨、杏,实例：松、杉、柏,第一页，共三十八页。,第二页，共三十八页。,花的结构：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊(cru)和雄蕊,第三页，共三十八页。,4、花的作用(zuyng),被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要(zhyo)部分,二、被子植物(biz-zhw)花粉粒的形成,1、雄蕊的结构,雄蕊：,第四页，共三十八页。,2、花药(huyo)的结构,第五页，共三十八页。,第六页，共三十八页。,3、花药(huyo)的发育,第七页，共三十八页。,花粉(hufn)是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞,4、被子植物(biz-zhw)的花粉发育,花粉粒的形成(xngchng),经历时期：,四分体时期、单核期、双核期,第八页，共三十八页。,第九页，共三十八页。,两个精子和一个营养(yngyng)核的基因型相同,第十页，共三十八页。,第十一页，共三十八页。,花粉粒类型(lixng),一个成熟(chngsh)的花粉粒即为雄配子体，有两种情况：,二核花粉粒:成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子(jngz)在花粉管中形成）,三核花粉粒:有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。,第十二页，共三十八页。,三、被子植物(biz-zhw)胚囊的形成,1、雌蕊(cru)的组成,柱头(zhtu)、花柱、子房,2、子房的结构,第十三页，共三十八页。,被子植物子房(zfng)的结构,胚珠(pi zh)的结构,花粉管,精 子,卵细胞,极核,子房壁,珠被,珠孔,第十四页，共三十八页。,花粉落到雌蕊柱头上以后，在柱头上黏液的刺激下，花粉开始萌发并形成花粉管，花粉管沿着花柱向胚珠方向生长，到达胚珠后从珠孔绕过卵细胞进入胚囊，到达胚囊中卵细胞和极核之间，这时花粉管的前端破裂，两个精子释放出来，其中一个精子与两个极核结合形成受精极核，另一个精子与卵细胞结合形成受精卵，这是被子植物(biz-zhw)特有的双受精现象,4、受精(shu jng)过程,第十五页，共三十八页。,第十六页，共三十八页。,5、发育(fy)结果,第十七页，共三十八页。,第十八页，共三十八页。,（二）产生花粉(hufn)植株的两种途径,说明：两种途径之间并没有(mi yu)绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。,第十九页，共三十八页。,不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难；挑选单核期花药方法(fngf)：应当选择完全未开放的花蕾，菌少，易消毒。,（三）影响(yngxing)花药培养的因素,1、材料(cilio)的选择：,不同种类植物的诱导成功率不同。同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。合适的花粉发育时期：花期早期时的花药最佳。选择最合适的花粉发育时期,第二十页，共三十八页。,1影响花粉植株的主要因素:和 等。2材料的选择：从花药来看，应当选择（初花期、盛花期、晚花期）的花药；从花粉来看，应当选择（四分(s fn)体期、单核期、双核期、萌发期）的花粉；从花蕾来看，应当选择（完全未开放、略微开放、完全盛开）的花蕾。,思考4除此之外，你认为影响花粉诱导成功的因素(yn s)还有哪些？,思考5为什么选择合适(hsh)的花粉发育期是诱导花药培养成功的重要因素？,材料的选择 培养基的组成,植物的种类、亲本植株的生理状况、亲本生长条件、材料的低温处理、接种密度、培养基组成、培养的环境条件等。,这是因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，在花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。,第二十一页，共三十八页。,花药培养所采用的培养基各成分中植物生长调节剂的水平和配比起决定作用。诱导愈伤组织或胚状体产生的培养基：广泛使用 2，4-D、IAA；诱导分化的培养基常除去2，4-D而以IBA代之。亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种(jizhng)密度、培养的环境条件等对诱导的成功率都有一定的影响。,2、培养基的组成(z chn)：,3、其他(qt)因素：,第二十二页，共三十八页。,花瓣松动后，微生物就可能侵入(qnr)到花药，给材料的消毒带来困难。,为什么花瓣松动会给材料(cilio)的消毒带来困难？,第二十三页，共三十八页。,月季花药培养时的花粉粒最好是（）A、四分体时期(shq)B、单核居中期 C、单核靠边期 D、二核或三核花粉粒,C,2、培养基：,花药培养基所采用的培养基可能因植物的不同(b tn)而有所变化小麦中为N6，马铃薯、月季中为MS，油菜中为B5培养基,第二十四页，共三十八页。,3、其他因素亲本植株的生长条件、材料的低温(dwn)预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响,六、实验(shyn)操作,（一）材料(cilio)的选取,某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。,最常用的方法有醋酸洋红法,1、方法,第二十五页，共三十八页。,醋酸洋红(ynghng)法染色机理,醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色(zhu s)染成红色。,将体积分数45的醋酸(c sun)100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50，过滤即可。,醋酸洋红的配置,2、醋酸洋红法,第二十六页，共三十八页。,第二十七页，共三十八页。,将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎(do su)，盖上盖玻片在显微镜下检查。,染色(rns)操作,3、焙花青铬钒法,将无水酒精(jijng)与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀,卡诺氏固定液的配制方法,第二十八页，共三十八页。,花药应该(ynggi)在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。,将5g铬明矾K2SO4Cr2(SO4)24H2O加入90ml蒸馏水中，溶解(rngji)后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。,焙花青铬钒溶液(rngy)的配制方法,染色操作,第二十九页，共三十八页。,（二）材料(cilio)的消毒,1、酒精(jijng)处理,花蕾用体积分数(fnsh)为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。无菌水清洗无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分,第三十页，共三十八页。,2、消毒液处理(chl),（三）接种(jizhng)和培养,放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中24分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）无菌水冲洗35次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态(zhungti)，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。,第三十一页，共三十八页。,在无菌条件下除去萼片(pin)和花瓣用镊子取出花药,要彻底去除花丝(hu s)，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成,立即(lj)将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。,1、剥取花药,勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织,2、接种,注意：,第三十二页，共三十八页。,培养(piyng)条件：温度控制在25左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。,3、培养(piyng),培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化(fnhu)培养基上，以便进一步分化(fnhu)出再生植株,注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。,第三十三页，共三十八页。,在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖(shngzh)核融合造成的）,4、鉴定(jindng)和筛选,第三十四页，共三十八页。,精品(jn pn)课件！,第三十五页，共三十八页。,精品(jn pn)课件！,第三十六页，共三十八页。,5、植物组织培养技术(jsh)与花药培养技术(jsh)的异同点：,第三十七页，共三十八页。,内容(nirng)总结,1、被子植物定义：凡是种子有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物。二核花粉粒:成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。说明：两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎。不同种类植物的诱导成功率不同。合适的花粉发育时期：花期早期时的花药最佳。思考(sko)5为什么选择合适的花粉发育期是诱导花药培养成功的,第三十八页，共三十八页。,