免疫原和抗血清的制备免疫原和抗血清的制备(zhìbèi)(zhìbèi)第一页，共四十九页。•免疫原是能够引起机体产生抗体，并能与之发生反应的物质•一、颗粒性抗原的制备：•1.颗粒抗原指细胞抗原或细菌抗原。2.细菌抗原：•H抗原有动力的菌株O抗原100℃2-2.5h为了破坏(pòhuài)H抗原，获得O抗原Vi抗原•3.虫卵、细胞膜颗粒抗原呈乳浊状，多用V内免疫，较少用佐剂作皮内注射第二页，共四十九页。二、可溶性抗原的制备：组织和细胞粗抗原的制备：1.组织和细胞混合抗原的制备：组织匀浆制备：标本要求：新鲜或低温（＜-40℃）保存的去除表面包膜或结缔组织或一些大血管，脏器应进行灌注，除去血管内残留血液制备处理好组织→0.05％NaN3生理盐水洗净→剪成小块粉碎→高速组织捣碎机法→2000-3000rpm离心10min研磨法：玻璃(bōlí)匀浆器,乳钵研磨→上清10000-20000rpm20-30min高速离心第三页，共四十九页。2.细胞抗原(kàngyuán)的制备：•细胞抗原细胞膜蛋白抗原细胞浆抗原细胞核及核膜抗原粉碎：（1）反复冻融法（2）冷热交替法：适合细菌，病毒蛋白质及核酸（3）超声破碎法：适合于微生物和组织细胞细菌，尤其真菌厚膜孢子难破坏（4）自溶法：利用(lìyòng)组织和微生物的自身酶系需一定PH和温度动物组织cell0-4℃微生物室温（5）溶菌酶法：一定PH（PH8.0），溶菌酶可专一破坏菌胞。蜗牛酶，纤维素酶消化细菌和组织cell（6）表面活性剂处理法第四页，共四十九页。(zhìbèi)可溶性抗原绝大部分为蛋白质1.超速离心和梯度密度离心法：用来分离亚细胞部分及大分子蛋白质1）差速离心：高低速交替进行。将大分子物质分离2）梯度密度离心：区带分离法，通过梯度密度来维持重力的稳定性，通常分离的悬液中的颗粒比液体重，要使之上浮，必须(bìxū)加入第三种成份，其密度连续或不连续升高，即所谓梯度3）第三种成份多用甘油、蔗糖氯化色，氯化铷适合于少部分大分子抗原，对于大量的中、小分子量的蛋白质抗原不适用此法第五页，共四十九页。2.选择性沉淀法：•用沉淀剂或改变某些条件促使抗原成分沉淀1）核酸除去法：（1）提取沉淀剂：（2）核糖核酸酶降解法：用DNA或RNA酶与提取液作用30-60min（4℃），即可除去核酸2）盐析沉淀法：（1）抗原的粗筛33-50％饱和度的硫酸铵（2）提取丙种球蛋白主要为IgG33-40％饱和度的硫酸铵（3）抗原的浓缩3）有机溶剂沉淀法：有机溶剂多为酒精和丙酮4）水溶性非离子型聚合物沉淀法：PEG+蛋白质颗粒→沉淀、复合物、蛋白...
