2022年医学专题—促红细胞生成素(1).ppt

基因工程(jyn gngchng)药物促红细胞生成素（EPO）,第一页，共十八页。,第二页，共十八页。,什么(shn me)是EPO？,EPO：是促红细胞生成素（Erythropoietin）的英文简称。促红细胞生成素：最初是从肾脏中分离出来能刺激前体红细胞增生、分化的一种细胞因子。人体血液中的促红细胞生成素：是由肾脏和肝脏分泌(fnm)的一种激素样物质，能够促进红细胞生成。它与其受体(EPO-R)结合后共同介导缺氧的生理反应。,第三页，共十八页。,EPO的用途(yngt),医疗用途：增加红血球的数目，用于贫血、组织断离、早产儿，用在癌学和血液学方面。体育用途(兴奋剂)：增加训练耐力和训练负荷(fh)，属于国际奥委会规定的违禁药物。在2008年北京奥运会中第一例的兴奋剂。,第四页，共十八页。,EPO的 疗效(lioxio),1、肾性贫血患者EPO水平较低，在进行治疗过程中，往往通过注射EPO来提高体内EPO水平进行治疗，从而帮助(bngzh)病人增加红细胞数量，此时EPO水平有所上升。2、其他贫血如缺铁性贫血、巨细胞性贫血患者EPO水平不降低，但也可以使用EPO治疗，此时浓度也会有所升高。3、再生障碍性贫血和骨髓造血功能不全患者EPO水平升高。,第五页，共十八页。,EPO的纯化(chn hu)历史,1、Miyake的七步法：纯化步骤太多，对设备及操作要求也较高，不适合工业生产的特点。2、Spivik利用凝集素亲和层析纯化EPO：由于凝集素亲和层析凝胶易被杂蛋白不可逆吸附，使得分离效果降低，成本增高，也不利于大规模生产。3、近年来则利用三步层析(cn x)法三步纯化基本流程 等。,第六页，共十八页。,EPO的工艺流程(n y li chn)三步层析法,1、染料配基亲和层析(cn x)反相疏水层析(cn x)离子交换层析(cn x);2、染料配基亲和层析反相疏水层析分子筛层析;3、反相疏水层析离子交换层析分子筛层析。,第七页，共十八页。,EPO的工艺流程(n y li chn)三步纯化基本流程,第一步：反相柱色谱 样品浓缩(nn su)约96.7%透析第二步：DEAE-离子交换色谱第三步：分子筛色谱 总回收率 30%比活 1.5*108U/g蛋白,第八页，共十八页。,第一步：反相色谱,C6 反相柱（2cm*2cm）（创新生物技术(jsh)公司）流程：上样 50ml/min（柱结合量约5mg蛋白/ml介质)去离子水平衡至检测基线 10%80%乙醇胍线性梯度洗脱 检测并收集含EPO主峰 ELISA测定结果：60%乙醇-1mol/L盐酸胍洗出EPO,第九页，共十八页。,透析,透析液：10倍体积的10mmol/L Tris.HCl(pH 7.5)-2%蔗糖缓冲液透析次数(csh)：2时间：56h,第十页，共十八页。,第二步：离子交换(l z jio hun)柱,DEAE型离子交换柱流程：10mmol/L Tris.HCl(pH7.5)缓冲液平 上样 20ml/min（柱结合量20mg/ml）10mmol/L Tris.HCl(pH7.5)缓冲液平衡至基线 添加NaCl入缓冲液，进行截状梯度洗脱（NaCl浓度(nngd)分别为：50，70，125mmol/L）结果：ELISA检测盒表明75mmol/L洗脱峰中含EPO,第十一页，共十八页。,第三步：分子筛色谱(s p),Sephacryl S-200 色谱分析流程：上样体积(tj)80ml 流速 2ml/min 流动相 20mmol/L 柠檬酸钠-100mmol/L NaCl 缓冲液结果：收集的rHuEPO保留时间约为45min 比活性约为1.5*108U/g蛋白；纯度 98%（SDS-PAGE检测）免疫原性检测：Western blot,第十二页，共十八页。,EPO的销售(xioshu)情况,重组促红细胞生成素，也称超级“重磅炸弹”基因药物。1985年科学家应用基因重组技术，在实验室获得重组人EPO（rhEPO），1989年安进（Amgen）公司的第一个基因重组药物Epogen获得FDA的批准，适应症为慢性肾功能衰竭导致的贫血、恶性肿瘤或化疗导致的贫血、失血后贫血等，其市场(shchng)表现不俗，1999年销售值达到17.6亿美元，2000年19.6亿美元，2002年22.6亿美元，2003年24.4亿美元，成为名副其实的“重磅炸弹”基因药物。,第十三页，共十八页。,安进（Amgen）开发的用于治疗恶性贫血症的第二代促红细胞生成素新产品Arnesp2001年得到FDA的批准，Arnesp2002年初正式(zhngsh)上市。Arnesp：是一种“高糖基化”促红素产品。其促进红细胞生成的能力大大优于第一代EPO（促红细胞生成素）产品。第一年上市即大获全胜，赢得开们红，Arnesp2002年全年销售额为4.2亿美元，2003年全年销售额为15.4亿美元。估计在今后3年内，Arnesp将创造10亿15亿美元的市场销售额并夺取现有EPO生产商的部分市场，其市场前景不可估量。,第十四页，共十八页。,2001年，EPO（包括(boku)Arnesp）的全球销售额达21.1亿美元，2002年达26.8亿美元，2003年全世界EPO的年销售额超过50亿美元。创下生物工程药品单个品种之最，是当今最成功的基因工程药物。强生（Johnson&Johnson）公司的促红细胞生成素Procrit/Eprex更是表现不俗，2001年销售额34.42亿美元，2002年销售额42.69亿美元，2003年销售收入达到39.84亿美元。,第十五页，共十八页。,目前，国内已有10多家单位获准生产红细胞生成素。沈阳三生和上海麒麟鲲鹏（中国）生物药业的产品在国内医院的销售额独领风骚，2001年EPO的国内医院销售总额约为47449万元，2002年为49508万元，2003年上半年为28606万元。估计国内的年市场容量在20到30亿元左右，但目前年销售额只有区区(qq)5亿元左右。综上所述，EPO的市场前景非常可观。,EPO的市场前景,第十六页，共十八页。,THANK YOU!,第十七页，共十八页。,内容(nirng)总结,基因工程药物促红细胞生成素（EPO）。基因工程药物促红细胞生成素（EPO）。3、近年来则利用三步层析法三步纯化基本流程(lichng)。EPO的工艺流程(lichng)三步层析法。EPO的工艺流程(lichng)三步纯化基本流程(lichng)。THANK YOU,第十八页，共十八页。,