动物细胞融合与单克隆抗体(讲课)(1).pptx

2.2 动物细胞工程,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,第一页，共三十二页。,原生质体融合,杂合的原生质体,再生出细胞壁,杂种细胞,细胞分裂,分化发育,愈伤组织,杂种植株,温故知新:,植物体细胞杂交过程,第二页，共三十二页。,材料1:1970年，有两位科学家做了一个人鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？,人-鼠(想像图),第三页，共三十二页。,一、动物细胞融合,1.概念：,动物细胞融合cell fusion也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。,2、原理：,细胞膜的流动性,第四页，共三十二页。,3.融合过程：,诱导融合的方法？,第五页，共三十二页。,诱导方法：,物理方法：,化学法：,生物法：,灭活的病毒,电激等,聚乙二醇PEG),第六页，共三十二页。,为什么灭活的 病毒能作诱导剂？,3.融合过程：,第七页，共三十二页。,灭活病毒诱导细胞融合的原理：,病毒外表含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜翻开，细胞发生融合。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。,P52生物技术资料卡,第八页，共三十二页。,植物细胞杂交与动物细胞融合的比较,细胞膜的流动性细胞的全能性,细胞膜的流动性,纤维素酶、果胶酶,胰蛋白酶,物理方法离心、振荡、电激 化学方法PEG,物理、化学方法灭活的病毒,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,第九页，共三十二页。,4.意义：,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交种间、属间、科间、动植物之间成为可能。,5.应用：,最重要的用途是制备单克隆抗体,第十页，共三十二页。,动物细胞融合,物理法：化学法：生物法：,诱导融合的方法,原理：,细胞膜的流动性,过程：,离心、震动、电激,聚乙二醇PEG),灭活的病毒,动、植物细胞融合的主要区别,用途：,最重要的用途是制备单克隆抗体,第十一页，共三十二页。,1.抗体由何种细胞产生？如何产生？2.抗体的化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？3.用传统的方法如何获得抗体？,(三)单克隆抗体,第十二页，共三十二页。,第十三页，共三十二页。,1.抗体由何种细胞产生？如何产生？2.抗体的化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？3.用传统的方法如何获得抗体？,(三)单克隆抗体,第十四页，共三十二页。,抗体的传统生产方法,从血清中别离抗体,该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,第十五页，共三十二页。,单克隆抗体的制备,单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学 性质单一特异性强的抗体,利用效应B细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,设计方案：,第十六页，共三十二页。,1、过程,注射抗原,细胞融合、筛选,筛选，继续培养,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,第十七页，共三十二页。,单克隆抗体的制备,第十八页，共三十二页。,骨髓瘤细胞,免疫小鼠,筛选,克隆、筛选,体内培养,体外培养,B淋巴细胞,选择培养基,抗体检测,第十九页，共三十二页。,1、只考虑两两融合融合细胞几种类型？2、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什 么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？3、杂交瘤细胞有何特点？4、本过程利用的哪些技术？,思考以下问题：,第二十页，共三十二页。,2、单克隆抗体的优点,特异性强、灵敏度高,第二十一页，共三十二页。,3、单克隆抗体的应用,1作为诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速,如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等,第二十二页，共三十二页。,2运载药物,生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤,(“生物导弹 单抗导向，药物为弹头),第二十三页，共三十二页。,看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？,第二十四页，共三十二页。,有梦想，才会有创造！,已成功的动物细胞融合实例有很多，如人小鼠、人兔、人鸡、鼠兔、鸡鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌鸡、人胡萝卜 等细胞的融合。,想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。,生物种间杂交想像图,第二十五页，共三十二页。,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞,A,巩固练习,2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的选项是 诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段根本相同 C.操作步骤根本相同 D.都能形成杂种细胞,D,第二十六页，共三十二页。,3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是 A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心,B,第二十七页，共三十二页。,5.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A.B.C.D.,C,6.“生物导弹是指 A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物,D,第二十八页，共三十二页。,A、B细胞为动物细胞,请据图答复以下的问题:,A细胞,B细胞,C细胞,D细胞,(1)假设A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞,那么D细胞称为 细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征,一方面因具有骨髓瘤细胞的 性质,通过 方式产生大量细胞,我们称之为 过程;另一方面能分泌大量的抗体,我们把该过程分泌的抗体称.,杂交瘤,连续分裂,有丝分裂,单克隆,单克隆抗体,练一练,第二十九页，共三十二页。,(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是,合成该物质的场所是,它是由 控制合成的,合成过程包括 和 两个重要步骤.,球蛋白,核糖体,基因,转录,翻译,(3)D细胞中产生的抗体具有 作用,与血清抗体相比其优越之处在于 强 高.,免疫,特异性,灵敏度,第三十页，共三十二页。,(4)假设A为人细胞,B为鼠细胞,用同位素标记A细胞膜上的蛋白质,B不标记,在C细胞时,检测结果发现整个细胞一半有放射性另一半没有.在D细胞时,检测结果发现整个细胞都有放射性,请解释原因.,构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动,第三十一页，共三十二页。,内容总结,2.2 动物细胞工程。那么，如何实现人鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢。动物细胞融合cell fusion也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。1作为诊断试剂最广泛应用。看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步。有梦想，才会有创造,第三十二页，共三十二页。,