动物细胞培养和核移植技术-(2)(1).pptx

动物细胞工程,其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的根底。,第一页，共二十四页。,烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？,思考？,第二页，共二十四页。,取该患者的皮肤进行细胞培养,获得人造皮肤后再移植。,第三页，共二十四页。,一、概念,是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。,二、原理,细胞分裂增殖,一、动物细胞培养,第四页，共二十四页。,(三)、动物细胞培养过程,取动物组织块,剪碎组织,胰蛋白酶处理,细胞培养,单个细胞,动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的根底,剪碎组织,及胰蛋白酶处理的目的？,剪碎组织及胰蛋白酶处理的目的：将组织分散成单个细胞，有利于细胞与培养液充分接触，便于培养。,制成细胞悬液,动物胚胎或幼龄动物器官,因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。,第五页，共二十四页。,四动物细胞生长特性,1.细胞贴壁：细胞悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养 皿的内外表光滑 无毒、易于贴附。,2.接触抑制,第六页，共二十四页。,接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到外表相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。,50代以后,接触抑制,细胞为单层,50代以后细胞失去接触抑制,第七页，共二十四页。,原代培养：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。,第八页，共二十四页。,培养过程：,动物胚胎或幼龄动物的细胞、组织或器官,细胞悬浮液,单个细胞,剪碎,细胞贴壁,剥离 分瓶,局部细胞的细胞核型发生变化,动物细胞培养最终不能培养成动物体,接触抑制,第九页，共二十四页。,培养器皿,第十页，共二十四页。,超净工作台,实验设备,细胞培养箱,倒置显微镜,第十一页，共二十四页。,五、动物细胞培养条件,1、无菌、无毒的环境 添加一定量的抗生素；定期更换培养液2、营养 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.27.44、气体环境 O2和CO295%空气和5%CO2,使用合成培养基时，需参加血清、血浆等,补充合成培养基中缺乏的物质，如血清激素、氨基酸等。,CO2有调节PH的作用。,第十二页，共二十四页。,思考与讨论,1、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？2、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？,主要是蛋白质。不行，因为动物细胞培养适宜PH为7.27.4，而胃蛋白酶适宜PH为2.0，胃蛋白酶会失去活性。,长时间会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用。所以应控制好胰蛋白酶的消化时间。,P44,第十三页，共二十四页。,3、动物细胞培养液与植物组织培养基相比，有何独特之处？,4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？,动物细胞培养液的独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等,不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体,第十四页，共二十四页。,植物组织培养和动物细胞培养的比较,第十五页，共二十四页。,动物细胞培养技术的应用,生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。用于检测有毒物质用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据,第十六页，共二十四页。,P50,动物细胞培养要经过脱分化过程吗？为什么？不经过。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力。,第十七页，共二十四页。,二、动物体细胞核移植技术和克隆动物,1.概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。,核移植,受体细胞：,细胞分化程度低，恢复全能性容易,用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。2.原理：动物体细胞核的全能性。,难度高,M期的卵母细胞,第十八页，共二十四页。,选用去核卵母细胞的原因：卵母细胞比较大，容易操作；细胞质多，营养丰富，含有促进细胞核全能性表达的物质。,胚胎移植,动物细胞核移植,原理：动物细胞核具有全能性和细胞膜的流动性,第十九页，共二十四页。,讨论：,1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？,为使遗传物质全部来自有重要利用价值的动物。,P49,第二十页，共二十四页。,2.用于核移植 的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？培养的动物细胞一般当传代至1050代左右时，局部细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而 10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。,第二十一页，共二十四页。,3.你认为用上 述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是。克隆动物绝大局部DNA来自于供体细胞核，少局部DNA来自于受体卵母细胞的线粒体。还受动物生活环境的影响。,第二十二页，共二十四页。,1.加速家畜遗传改进进程2.保护濒危动物3.医药卫生领域4.作为异种移植供体5.应用于组织器官的移植,体细胞核移植技术的应用前景,第二十三页，共二十四页。,内容总结,动物细胞工程。取该患者的皮肤进行细胞培养,获得人造皮肤后再移植。要求：培养瓶或培养。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。1、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分。生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力。体细胞核移植技术的应用前景,第二十四页，共二十四页。,