一、免疫细胞的特征1、免疫细胞的形态学特征理化性状生物学特性2、免疫细胞的膜分子特征CD分子第一页，共七十五页。第二页，共七十五页。NKcells吞噬溶酶体第三页，共七十五页。第四页，共七十五页。二、免疫细胞的别离技术1、密度梯度离心法2、黏附别离法3、荧光激活别离法4、磁性别离法5、其他别离法第五页，共七十五页。1、密度梯度离心法聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，亲水性高，平均分子量为400,000，当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少局部细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中别离到单个核细胞。第六页，共七十五页。离心前离心后稀释抗凝血淋巴细胞别离液血浆单个核细胞粒细胞红细胞第七页，共七十五页。2、黏附别离法-纯淋巴细胞群的别离贴壁法：将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃温箱静置1h左右，单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上，而未贴壁的非粘附细胞几乎为纯淋巴细胞，继用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。因B细胞也有贴壁现象，用本法别离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。第八页，共七十五页。2、黏附别离法：淋巴细胞亚群的别离尼龙毛法：混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞那么通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。T细胞得率为20-30%左右。亲和板法：利用亲和层析法别离淋巴细胞亚群，其原理是各种淋巴细胞亚群具有不同的抗原性，将相应抗体结合于塑料平板上，继加细胞悬液，凡抗原阳性的细胞那么与相应抗体结合，抗原阴性的细胞可从未吸附的细胞悬液中获取。吸附柱法：将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶SephadexG10的柱层中，凡有粘附能力的细胞绝大局部被吸附而粘滞在柱层中，从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。此法简单易行，对细胞极少损害。第九页，共七十五页。3、荧光激活别离法〔FACS〕第十页，共七十五页。流式细胞仪第十一页，共七十五页。4、磁性别离法〔1〕磁铁吸引法：利用单核细胞具有吞噬的特性，在单个核细胞悬液中加直径为3μm的羰基铁颗粒，置37℃温箱内短时旋转摇动，待单核细胞充分吞噬羰基铁颗粒后，用磁铁将细胞吸至管底，上层液...
