郎朗E-mail:lang8968@sohu.com组织(zǔzhī)和细胞培养技术第一页,共六十页。第二页,共六十页。一、组织培养的诞生与发展简史1886,His提出原始的胚胎神经元或成神经细胞的细胞质向外突起而形成轴突,不断延伸,直至其前端与周围感觉器官或肌肉(jīròu)纤维接触为止。1890,Cajal应用胚胎神经组织切片的银渍染色技术研究神经元的发生,结果支持了His的学说。第三页,共六十页。第四页,共六十页。第五页,共六十页。第六页,共六十页。卵细胞的形成(xíngchéng)过程第七页,共六十页。第八页,共六十页。者活过40岁,2.6%活过50岁。患者的寿命通常取决于有无严重的先天性心脏病第九页,共六十页。第十页,共六十页。第十一页,共六十页。第十二页,共六十页。一、细胞培养中常用的仪器设备1.无菌室:密闭性;通风透气良好;便于消毒;方便进出2.超净工作台:使无菌空气以微流(0.32-0.48米/秒)方式,从工作台内流向工作台外。3.纯水器:18.2MΩ,25℃4.压力(yālì)蒸气消毒器:玻璃器皿(121℃,30min),塑料(115℃,15min)第十三页,共六十页。224第十四页,共六十页。第十五页,共六十页。CO2培养箱设定的条件为37℃,5%CO2。使用CO2培养箱培养细胞(xìbāo)时应注意的问题:①用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证通气。②保持培养箱内空气干净。定期消毒③箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度,避免培养液蒸发。CO2培养箱第十六页,共六十页。干燥箱水浴锅第十七页,共六十页。纯水仪第十八页,共六十页。第十九页,共六十页。液氮罐离心机第二十页,共六十页。酶标仪微孔(wēikǒn)ɡ板震荡器第二十一页,共六十页。第二十二页,共六十页。2.1原理第二十三页,共六十页。第二十四页,共六十页。超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动(qūdòn)ɡ空气通过高效滤器除去空气中的微生物,使空气得到净化,并使无菌空气以微流(0.32-0.48米/秒)方式,从工作台的工作空间流向工作空间以外,保证工作空间的绝对“无菌”。第二十五页,共六十页。1.玻璃器皿:玻璃瓶培养(péiyǎng)瓶第二十六页,共六十页。移液管离心管第二十七页,共六十页。培养(péiyǎng)瓶第二十八页,共六十页。培养板第二十九页,共六十页。滤头第三十页,共六十页。第三十一页,共六十页。1.玻璃器皿的清洗1.1浸泡1.2刷洗1.3浸酸1.4冲洗成分弱清洁液次强酸清洁液强酸清洁液重铬酸钾(zhònèsuānjiǎ)ɡɡ(g)10012063硫酸(ml)1002001000蒸馏...