病理新技术病理新技术(jìshù)(jìshù)在子宫颈在子宫颈CINCIN的应的应用用河南省人民(rénmín)医院病理科孔令非第一页,共五十一页。病理学新技术(jìshù)FISH原位杂交免疫(miǎnyì)组织化学生物传感器第二页,共五十一页。荧光原位杂交Fluorescenceinsituhybridization原理利用DNA碱基对的互补性,将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补(hùbǔ)的目标样本的DNA(玻片上的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况第三页,共五十一页。FISH操作(cāozuò)样本预处理脱蜡,脱水及水化,消化,探针、样本变性78℃探针+样本杂交45-50℃杂交后洗涤结果观察第四页,共五十一页。FISH探针(tànzhēn)种类CSP着丝粒探针(tànzhēn)GLP特异性位点探针(tànzhēn)染色体整臂探针第五页,共五十一页。FISH探针(tànzhēn)的类型全染色体涂抹探针(WCP)染色体计数(jìshù)(着丝粒)探针(CSP)位点特异性探针(GLP)单色特异性探针双色分离重排探针双色双融合易位探针第六页,共五十一页。IgHBcl2IGH/BCL2探针14(灰)号和18号(黑)染色体IgH基因Bcl-2基因杂交正常异常融合基因扩增双色双融合(rónghé)易位探针(IGH/BCL2)第七页,共五十一页。FISH的特点(tèdiǎn)操作简单(jiǎndān)检测快速结果易观察灵敏性和特异性高可检测样本种类多空间定位精确第八页,共五十一页。FISH检测(jiǎncè)在临床中的应用产前诊断血液病检测(jiǎncè)实体瘤检测第九页,共五十一页。端粒,端粒酶及作用(zuòyòng)端粒是真核细胞染色体末端的特殊NDA-蛋白结构,其DNA含大量TTAGGG重复序列,在进化中高度保守DNA酶不能复制线性DNA(端粒是线性DNA)大多数体细胞的端粒会随周期性复制而缩短,最终达到一个使染色体完整性丧失的临界点,细胞增殖停止;许多肿瘤细胞端粒酶活性增高,是肿瘤细胞增殖的关键步骤作用:o保护染色体基因组免受降解或重组o为染色体末端提供一种可消耗(xiāohào)的非编码序列,以缓解或取消末端复制所带来的染色体DNA进行性缩短生殖细胞具有端粒酶活性,其端粒不随年龄增加而缩短,故成为永生细胞第十页,共五十一页。端粒酶由RNA,DNA及蛋白质组成,本质是一种逆转录酶端粒酶活性决定于端粒酶RNA(humantelomeraseRNA,hTERC)和端粒酶催化亚单位(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)ohTERC是端粒长度稳定的直接因素保持端粒稳定、基因组完整、细胞(...