2022年医学专题—子宫颈鳞状上皮病变中HPV感染(1).ppt

病理新技术(jsh)在子宫颈CIN的应用,河南省人民(rnmn)医院病理科 孔令非,第一页，共五十一页。,病理学新技术(jsh),FISH原位杂交免疫(miny)组织化学生物传感器,第二页，共五十一页。,荧光原位杂交Fluorescence in situ hybridization原理利用DNA碱基对的互补性，将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补(h b)的目标样本的DNA(玻片上的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况,FISH,第三页，共五十一页。,FISH操作(cozu),第四页，共五十一页。,FISH 探针(tn zhn)种类,CSP着丝粒探针(tn zhn),GLP特异性位点探针(tn zhn),染色体整臂探针,第五页，共五十一页。,FISH探针(tn zhn)的类型,全染色体涂抹探针（WCP）染色体计数(j sh)（着丝粒）探针（CSP）位点特异性探针（GLP）单色特异性探针双色分离重排探针双色双融合易位探针,第六页，共五十一页。,双色双融合(rngh)易位探针(IGH/BCL2）,第七页，共五十一页。,FISH的特点(tdin),操作简单(jindn)检测快速 结果易观察灵敏性和特异性高可检测样本种类多 空间定位精确,第八页，共五十一页。,FISH检测(jin c)在临床中的应用,产前诊断血液病检测(jin c)实体瘤检测,第九页，共五十一页。,端粒，端粒酶及作用(zuyng),端粒是真核细胞染色体末端的特殊NDA-蛋白结构，其DNA含大量TTAGGG重复序列，在进化中高度保守DNA酶不能复制线性DNA（端粒是线性DNA）大多数体细胞的端粒会随周期性复制而缩短，最终达到一个使染色体完整性丧失的临界点，细胞增殖停止；许多肿瘤细胞端粒酶活性增高，是肿瘤细胞增殖的关键步骤作用：保护染色体基因组免受降解或重组为染色体末端提供一种可消耗(xioho)的非编码序列，以缓解或取消末端复制所带来的染色体DNA进行性缩短生殖细胞具有端粒酶活性，其端粒不随年龄增加而缩短，故成为永生细胞,第十页，共五十一页。,端粒酶由RNA，DNA及蛋白质组成，本质是一种逆转录酶端粒酶活性决定于端粒酶RNA（human telomerase RNA,hTERC)和端粒酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)hTERC是端粒长度稳定的直接因素保持端粒稳定、基因组完整、细胞(xbo)长期有活性和潜在的继续增殖能力人端粒酶基因位于3q26.3，该基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生,第十一页，共五十一页。,宫颈脱落(tulu)细胞及组织学FISH探针,CSP3,TERC,hTERC基因(jyn)定位于3q26.3,3号染色体着丝粒信号(xnho),第十二页，共五十一页。,All the three centers obtained similarly increasing trend of hTERC positive rates according to the severity of cervical lesions,for both cytological results and pathological diagnosis.,第十三页，共五十一页。,中国(zhn u)8350例子宫颈病变TERC扩增,第十四页，共五十一页。,hTERC检测(jin c)临床意义,伴有hTERC基因扩增的癌前病变的病人(bngrn)有52%96%的恶变可能。可预测CIN1/CIN2 向CIN3发展的风险因素，其灵敏度是100%，特异性是 70%.FISH是早期诊断和风险预测的有效手段,(AJP April 2005,Vol.166,No.4),第十五页，共五十一页。,hTERC基因检测在宫颈癌和宫颈癌前病变诊断中有重要价值魏丽惠，李亚里，吴瑞芳，陈忠，屠铮，江静，李静然北京大学人民医院妇科，北京，中国中国解放军总医院妇科，北京，中国北京大学深圳医院妇产科，深圳，中国犹他大学医学遗传学科，盐湖城，美国该研究显示，采用FISH技术检测hTERC基因扩增可在宫颈细胞学玻片上进行，具有无创性和客观性的特点，敏感度和特异度高，在宫颈癌和宫颈癌前病变的诊断中有重要价值。hTERC基因的异常(ychng)扩增可能成为宫颈病变恶性进展的早期标记物。,北京协和医院郎景和教授点评：在液基细胞学检查和检测人乳头状瘤病毒筛查宫颈癌的同时，检测hTERC基因，有望成为协助宫颈癌和宫颈癌前病变诊断及预测癌前病变是否向子宫颈癌(z n jn i)发展的重要指标，而造福广大妇女。,第十六页，共五十一页。,细胞(xbo)非典型性发育异常,细胞(xbo)癌变,阻止细胞(xbo)正常凋亡,高危型HPV持续性感染,人类染色体端粒酶基因(hTERC)扩增,致癌基因E6/E7编码的原癌蛋白表达,TERC基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生,P16表达,E7结合RB,E6结合p53,第十七页，共五十一页。,随着宫颈病变级别增加，hTERC的阳性率增加hTERC阳性率正常或炎症组 4.2-10.6%CIN1组 26.8%CIN2组 69.23%CIN3组 83.58%宫颈癌组 95.65%正常及CIN1的hTERC基因阳性率明显低于CIN2及以上者，P 0.01 hTERC诊断CIN2或CIN2以上(yshng)病变敏感度 81.40%特异度 95.04%阳性预测值 70.00%阴性预测值 97.29%,第十八页，共五十一页。,第十九页，共五十一页。,Human Papilloma Virus(HPV),环状双链DNA病毒超过120种亚型其中(qzhng)的72种亚型可引起肛门及生殖器疾病Low risk(LR-HPV):6,11,40,42,44,54,61,70,72,81High risk(HR-HPV):16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,63,78,82,第二十页，共五十一页。,HPV的生物学状态:游离(yul)或整合,在HPV感染的早期或瞬间感染，HPV基因组以游离的环状DNA形式存在于宿主细胞核中。(Condyloma and CIN-1)持续的HPV感染，使其DNA整合进宿主DNA，标志着恶性(xng)转化。(CIN2lesions),第二十一页，共五十一页。,持续性的HPV感染(gnrn)几乎总是发生在两种上皮的交界处（宫颈移行带、肛门和口咽）HPV通过宫颈鳞腺交界处感染基底细胞或HPV通过微创伤直接感染基底细胞临床治疗需要破坏移行带，而不仅仅是病变本身,第二十二页，共五十一页。,HPV 检测及预后预测(yc)价值,阴性预测价值(NPV)约 99%women not infected with HR-HPV have 30:PPV gradually increased with age and persistent HPV infection,第二十三页，共五十一页。,原为杂交(zjio)法,用标记的HPV探针在组织上或细胞(xbo)上进行原位的杂交，并进行显色特异性最强敏感性高直观可结合组织学或细胞学形态探针有：6/11,16/18,31/33,第二十四页，共五十一页。,导流杂交(zjio)法,扩增所取样本的DNA放在固定好基因探针的基因芯片上（21种亚型包括(boku)13种高危亚型16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68及5种低危亚型6,11,42,43,44和3种中国人群常见的亚型53,66,CP8304型进行杂交探针标记Biotin及碱磷酶用NBT/BCIP进行显色结果呈蓝紫色,第二十五页，共五十一页。,判定标准RLU/Cutoff的比值 1=阳性,50以内的数值对病情的严重程度并没有指示性，但50的数值对病情的严重程度的估计有指导意义。1=阴性，表示未检出13种高危型HPV DNA序列或标本中不含有高危型HPV DNA序列，又或者其浓度水平在测定方法的检测限度以下(yxi)，不能除外潜伏感染；如果接近但小于1.0且被怀疑有高危型HPV感染，应该重新采集标本。,第二十六页，共五十一页。,HC-II的应用(yngyng)条件,HPV test 不适用的情况：细胞学显示异型增生时年龄30岁的女性,细胞学检查结合HPV test,第二十七页，共五十一页。,HPV检测方法(fngf)的比较,第二十八页，共五十一页。,生物(shngw)传感器技术,24种HPV亚型，其中低危8种（6,11,40,42,43,44,54,70），高危(o wi)16种（16,18,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,81）可检测HPV的载量子宫颈细胞中HPV的情况 单独感染 混合感染（2、3，6种HPV型）,第二十九页，共五十一页。,子宫颈鳞状上皮病变(bngbin)中HPV感染,1.北京军区总医院病理科2.解放军总医院妇产科,第三十页，共五十一页。,CIN中需注意的问题(wnt),CIN病变也可表现为鳞状上皮的表面上皮显著的不典型增生，而非基底层细胞，是CINI的病理基础CIN病变累及腺体一般：鳞状上皮CINIII，进一步向下发展延伸至腺体，但未突破基底膜少数：鳞状上皮CINII，腺体鳞化也呈CINII，这时为表达腺体的改变，诊断为CINII累及腺体个别：在腺体鳞化的基础上出现(chxin)不典型增生，甚至出现(chxin)的不典型增生的程度超过表面鳞状上皮,第三十一页，共五十一页。,绝大多数的HPV感染(gnrn)可回退,Spontaneousregression,Spontaneousregression,Cancer,High-grade dysplasia,Low-grade dysplasia,Subclinical HPV infection,US Cases,300,000,11,000,1,400,000,30,000,000,HPV infection,Cervical Cancer,Spontaneous regression,第三十二页，共五十一页。,持续性HPV感染(gnrn)导致CIN2-3,LSIL 一般由瞬间HPV感染引起HSIL 发生在那些持续性HR-HPV感染2年以上的患者大多数年轻(ninqng)的女性(30 yrs)的HPV感染为暂时性的，将被自体免疫系统清除HPV持续性感染一般发生在老年女性,第三十三页，共五十一页。,HPV感染(gnrn)与机体免疫反应,阴道分泌物的粘液抗微生物多肽，抗体，酸性环境及锌离子等组成第一道防线子宫颈鳞状上皮（复层上皮）形成天然屏障，组成第二道防线内在的非特异性免疫防御系统即炎症反应，构成第三道防线局部(jb)的细胞免疫监视，可启动接触性级连反应，放大传递信号，形成针对壳蛋白L1的特异性细胞免疫反应大多数的HPV感染细胞将成为HPVL1抗原递呈细胞；细胞毒T淋巴细胞和辅助T淋巴细胞可识别此细胞，并通过免疫监视和免疫清除杀灭细胞,第三十四页，共五十一页。,CytoReact,用敏感的非同位素核酸杂交和免疫组织化学及免疫细胞化学的方法检测子宫颈细胞中HPV L1 蛋白的存在，可用于细胞学涂片，组织学切片(qi pin)的检测。广谱的HPV L1抗体可识别大多数的HPV L1蛋白（6,11,16,18,31,33,42,51,52,56，58）。,第三十五页，共五十一页。,基本原理特点(tdin),多聚物微球结合非同位素标记HPVL1DNA探针与多聚酶混合物（固态杂交液）解链及杂交过程与抗原修复过程合并标记物为碱性磷酸酶，底物为AEC原为杂交与免疫组化反应颜色重叠(chngdi)，提高敏感性20-30倍可检测出0.01pgHPV L1蛋白细胞核阳性表达（核膜及核）,第三十六页，共五十一页。,HPV L1的存在表明HPV病毒感染处于游离状态或瞬时感染期HPV L1阳性与异常细胞学的回退密切相关在 HPV(+)的病人中，H