细胞中DNA病毒测定 MNP标记法 GBT 41895-2022.pdf

GB/T41895-2022利用多重PCR扩增与文库构建试剂盒和附录A的多重PCR扩增引物，对内控对照扩增模板与待测样品扩增模板进行多重PR扩增和纯化，构建高通量测序文库。其中，多重PCR扩增循环数不超过25个。7.4高通量测序按高通量则序试剂盒和高通量测序仪的操作说明，对7.3中获得的高通量测序文库进行高通量测序，获得高通量测序数据。高通量测序的碱基数据量设置为每个高通量测序文库大于200Mb(1Mb=1000000bit)。8结果计算8.1目标病原体的噪音指数目标病原体的噪音指数按式(1)计算。IR图PR一NR3n833888:(1）式中：Px,一第i种目标病原体的噪音指数：,一内控对照中，第i种目标病原体的测序片段的数量：Nx一内控对照中，内控DNA的测序片段的数量。8.2目标病原体的信号指数目标病原体的信号指数按式(2)计算。ST=NT式中：S,一第i种目标病原体的信号指数：:一待测样品中，第i种目标病原体的测序片段的数量：Nx一待测样品中，内控DNA的测序片段的数量。9质量控制9.1测序数据量9.1.1当测序数据量不大于50Mb时，高通量测序文库构建失败，从7.3或之前的步骤开始重新试验。9.1.2当测序数据量介于50Mb至100Mb之间时，测序数据量不足，从7.4或之前的步骤开始重新试验。9.1.3当测序数据量不小于100Mb时，测序数据量合格。9.2检出标记位点数目内控DNA的检出标记位点数目大于或等于17个时，内控DNA检出标记数目合格：否则，从7.3或之前的步骤开始重新试验，3