饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 GBT 30955-2014.pdf

中华人民共和国国家标准饲料中黄曲雷毒素B,、B2、G1、G2的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T30955-2014中国标准出版社出版发行北京市初阳区和平里西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址：服务热线：400-168-0010010-685220062014年11月第一版书号：1550661-50141版权专有侵权必究GB/T30955-201450下，氨气吹干仪吹干，用适量的甲醇十水(45十55)溶液(4.5)定容为混合标准工作液，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各分别为0ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL。4.9PBS缓冲溶液：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL。4.10次氯酸钠。5仪器和设备实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。5.1高速均质器，18000r/min22000r/min,或震荡器。5.2黄曲霉毒素免疫亲和柱，柱容量300ng。5.3玻璃纤维滤纸，直径11cm,孔径1.5m。5.4玻璃定量管，10mL。5.5氮吹仪，50。5.6光化学衍生系统。5.7高效液相色谱仪，带荧光检测器，6试样采集与制备按GB/T14699.1采样；按GB/T20195用四分法缩减至500g,粉碎后过1mm孔径的分析筛，混匀后装入密闭容器，冷藏保存。7分析步骤7.1提取称取试样（粒度小于1mm)50.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及准确加入100.0mL(V,)甲醇十水(8十2)溶液(4.4)，以均质器高速搅拌提取2min,或震荡器震荡30min。定量滤纸过滤，准确移取10.0l(V2)滤液并加人40.0m(V3)PBS缓冲溶液(4.9)稀释，用玻鸦纤维滤纸过滤12次，至滤液澄清，备用。7.2净化将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃定量管下。准确移取10.0mL(V,)样品提取液注入玻璃定量管中，将空气压力泵与玻璃定量管连接，调节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，待溶液全部流出后，以10.0mL纯水清洗柱子2次，弃去全部流出液。准确加入1.0L(V)甲醇(4.1)洗脱，流速不超过1mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中，加纯水定容为2.0mL,供色谱检测用。7.3测定7.3.1色谱条件色谱柱：C1柱，长150mm,内径4.6mm,填料直径5m,或相当者。流动相：甲醇十水(45十55)溶液(4.5)。流速：0.8mL/min。检测波长：激发波长360nm:发射波长440nm。2