食品接触表面清洗消毒效果试验方法 三磷酸腺苷生物发光法 GBT 36004-2018.pdf

GB/T36004-20185.2.2.2高压灭菌锅。5.2.2.3离心机。5.2.2.4移液器，带已灭菌的一次性枪头。5.2.2.5经高压灭茵的玻璃器皿。5.2.2.6已灭菌塑料离心管，15mL。5.2.3采样和提取用灭菌镊子将5cm5cm的湿润灭菌滤纸片紧贴食品接触表面，并用镊子牵引滤纸在被测样品表面轻轻来回移动1mi,置于有5mL细胞裂解液的离心管中，充分振荡后，将离心管放人离心机中，设置离心机温度为4，离心力为12000g,离心时间5mi。离心后滤纸碎片聚集在离心管的底部，用移液器取出上层清液，用于后续测定。5.2.4检测按照ATP检测试剂盒说明书，将荧光素-荧光素酶混合物溶解到检测缓冲液中，加入足量的细胞提取液，用微孔板化学发光分析仪检测响应（有些系统要求将荧光素-荧光素酶混合物注射到样品中），得到RLU值.每份样品平行分析三次。5.2.5注意事项使用台式发光分析仪检测法需注意以下事项：a)检测ATP时应使用洁净无ATP的玻璃器皿；b)荧光素酵的冻逊次数不宜超过3次，反复冻融会导致其逐渐失活：c)裂解后样品中的ATP在室温不太稳定，需在4或冰上操作。ATP在冰上可以稳定长达6h:d)细菌能在无菌水中生存和紧殖，这会造成ATP的干扰，因此无菌水的质量应定期检验。6实验室清洗消毒效果评价方法6.1仪器6.1.1高压灭菌锅。6.1.2恒温培养箱。6.1.3离心机。6.1.4生物安全柜。6.2试剂和材料6.2.1大肠杆菌菌株。6.2.2LB液体培养基。配制方法：950mL实验用水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCI10g,摇动容器直至溶质溶解。用5mol/L NaOH调pH至7.0，用实验用水定容至1L在103kPa高压下蒸汽灭菌20min。6.2.3一次性塑料无菌培养皿，直径为9cm。6.2.4灭菌美工刀。6.2.5灭菌棉棒。6.2.6灭菌离心管。