饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法 GBT 19371.2-2007.pdf

ICS65.120B46中华人民共和国国家标准GB/T19371.2-2007代替GB/T19371.2-2003饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定高效液相色谱法Determination of methionine hydroxy analogue in feeds-High-performance liquid chromatography2007-06-21发布2007-09-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T19371.2-20076采样6.1采样步骤按GB/T14699.1采集实验室样品。6.2试样的制备将实验室样品粉碎，全部通过0.45mm筛，充分混匀，心于磨口瓶中备用。7分析步骤7.1提取称取适量制备好的试料2g5g(精确至0.0001g),置于150mL具塞三角瓶中，准确加入一定量的提取液，一般50mL100mL,混合后置于振荡器上剧烈振荡30min或置于超声水浴中提取30min,静置10min,离心或过滤，滤液备用。7.2水解准确移取滤液5mL于10mL具塞试管中，准确加入0.1mL氢氧化钾溶液(4,3)，手摇至少10s,准确加入0.2mL磷酸溶液(4.4)，手摇至少10s,水解液离心或过滤，滤液过0.45m滤膜后备用。7.3标准溶液的制备准确称取0.1136g液态蛋氨酸羟基类似物(88.00%)标准样品，用提取剂(4.2)定容至100mL,蛋氨酸羟基类似物浓度为1.00mg/mL。准确吸取2.5,5.0、10.0、20.0mL以上溶液至50mL容量瓶，用提取剂(4.2)定容至刻度后摇匀，此标准系列的浓度为0.05、0.10、0.20、0.40、1.00mg/mL。用以上标准系列与试样提取液同时做水解，测定。7.4HPLC测定7.4.1色谱条件流速：l.0mL/min。检测波长：210nm。进样量：20L50L。7.4.2测定向HPLC分析仪连续注人蛋氨酸羟基类似物标准溶液，直至得到基线平稳、峰形对称且峰面积能够重现的色谱峰。依次注入标准及试样水解液，积分得到峰面积，用标准系列进行单点或多点校准。8结果计算试样中蛋氨酸羟基类似物的含量X:以质量分数(%)表示，按式(1)计算：X:=-CXVX 1005555n(】)mX1000试样中羟基蛋氨酸钙的含量X2以质量分数(%)表示，按式(2)计算：X=n0881o0s48488488448448488488488448(2）式中：一由标准曲线查得的试样测定液中蛋氮酸羟基类似物的浓度，单位为毫克每毫升(g/mL):V一加到试样中的提取液体积，单位为毫升(mL):m一试样质量，单位为克(g);338.4一羟基蛋氨酸钙的分子质量；2