饲料中液态蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法 GBT 19371.2-2003.pdf

GB/T19371.2-20036.2试样的制备：将实验室样品粉碎，全部通过0.45mm筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。7分析步骤注意：液态蛋氨酸羟基类似物p川较低，操作时应避免接触皮肤，如不慎接触皮肤，立即用水清洗。7.1参比样品的制备为了检验分析的准确性，每次分析（尤其是初次测定）均应进行参比样品的测定。参照以下步蝶制备不同浓度的参比样品。注：添加用液态蛋氨酸羟基类似物要准确测定含量，混合样品可以用家庭用食品搅排机，确保样品混合均匀。，称量样品时，准确至小数点后两位。空白样品是指确保没有加入液态蛋氨酸羟基类似物的饲料样品。7.1.15.0%参比样品的制备：准确称取282.95g空白样品，准确加入17.05g液态蛋氨酸羟基类似物(88.00%)标准样品，混合均匀。7.1.20.4%参比样品的制备：准确称取138.00g空白样品，准确加入12.00g5.0%参比样品，混合均匀。7.1.30.2%参比样品的制备：准确称取144.00g空白样品，准确加入6.00g5.0%参比样品，混合均匀。根据需要配制不同浓度的参比样品。参比样品配制后室温下平衡三天后使用，6个月内有效。7.2提取称取试样2g5g(精确至0.0001g),置于150mL具塞三角瓶中，准确加入一定量的提取液（一般50mL100mL),混合后置于振荡器上剧烈振荡30min,静置10min,离心或过滤，滤液各用。7.3水解准确移取滤液(7.2)5mL于10mL具塞试管中，准确加入0.1mL氢氧化钾溶液(4.3)，手摇至少10s,准确加入0.2mL磷酸溶液(4.4)，手摇至少10s,水解液离心或过滤，滤液过0.2m滤膜后备用。7.4标准溶液的制备准确称取1.1360g液态蛋氨酸羟基类似物(88.00%)标准样品，用提取剂(4.2)定容至1000mL该溶液的浓度为1.00mg/mL。准确吸取2.5mL、5.0mL、10.0mL、20.0mL以上溶液至50mL容量瓶，用提取剂(4.2)定容至刻度后摇匀，此标准系列的浓度为0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、1.00mg/mL。用以上标准系列与试样提取液同时做水解，测定。7.5HPLC测定7.5.1色谱条件a)流速：l.0mL/min,b)检测波长：210nm。c)进样量：20L。7.5.2测定向HPIC分析仪连续注人液态蛋氨酸羟基类似物标准溶液，直至得到基线平稳，峰形对称且峰面积能够重现的色谱峰。依次注入标准、参比样品及试样水解液，积分得到峰面积，用标准系列进行单点或多点校准。8结果计算试样中液态蛋氨酸羟基类似物的含量X以质量分数表示，按式(1)计算：X=-cXVmX1000X10044684844440（】）