水溶液中核酸的浓度和纯度检测 紫外分光光度法 GBT 34796-2017.pdf

GB/T34796-2017水溶液中核酸的浓度和纯度检测紫外分光光度法1范围本标准规定了使用紫外分光光度法检测水溶液中核酸的浓度和纯度的原理、样品制备及检测方法。本标准适用于水溶液中核酸的浓度和纯度检测，可对浓度在5g/L及以上的水溶液核酸样品定量检测和纯度分析。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T11165实验室pH计GB/T26813双光束紫外可见分光光度计JJG646移液器检定规程3缩略语下列缩咯语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid)RNA:核糖核酸(ribonueleic acid)4原理核酸中嘌呤和嘧啶碱基有共轭双键，具有吸收紫外光的性质，其最大吸收值在波长为250m270nm之间。碱基与戊糖、磷酸形成核苷酸后其最大吸收峰不会改变，最大吸收波长约260m,吸收低峰在230nm。在波长260nm处，1单位OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50g/mL、单链DNA及RNA为40g/mL、单链寡核苷酸为33g/mL,利用此量和浓度关系，可用于计算核酸样品的浓度。5试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1DNA标准溶液小牛胸腺DNA标准溶液。5.2三羟甲基氨基甲烷缓冲液(1m0/L Tris-HC1,pH7.4)称取121.1gTis置于1L烧杯中，加入800mL去离子水，充分搅拌溶解，用NaOH调节pH值，