微生物快速测定方法 GBT 38488-2021.pdf

GB/T38488-2021微生物快速测定方法1范围本文件规定了用分子马达法、近红外免疫层析法和目标区域测序法快速测定微生物的方法。本文件中第一法一分子马达法适用于食品和生活饮用水中单核细胞增生李斯特氏菌(L。m00cytogenes)、副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、沙门氏茵(Salmonel-la)、阪崎克罗诺杆菌（阪崎肠杆菌）(Cronobacter sakazakii)、志贺氏菌(Shigella)、甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)的快速测定；第二法一近红外免疫层析法适用于食品和生活饮用水中单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、蛋乱弧菌、沙门氏菌、轮状病毒(Rotavirus)、诺如病毒(Noro-s)、甲型肝炎病毒的快速测定；第三法一目标区域测序法适用于食品和生活饮用水中沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌(Sta phylococcus aureus)、副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶耳森氏菌(Yersiniaenterocolitica)、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)、单核细胞增生李斯特氏菌、肠出血性大肠杆菌O157:H7(Enterohemorrhagic E.coiO157)、霍乱弧菌、阪崎克罗诺杆菌（阪崎肠杆菌）、创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的快速测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实险室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4分子马达法4.1原理ATP合成酶属于一种旋转型分子马达，由跨膜质子(H+)梯差驱动，其上的亚基为转子，转子负找越大，分子马达转速越低、跨膜转运的质子(H+)数量越少。在ATP合成称的亚基上连接亚基抗体-链霉亲和素-生物素-核酸探针（见附录A表A.2),当探测到目标病原微生物特异性基因序列并与其结合时，分子马达的转速变化可以间接地通过载色体(chromatophore)膜外标记的对pH敏感的荧光探针1,2-双十六烷基-3-甘油-磷酸乙醇胺(DHPE)来检测，从而实现对目标病原微生物的定性测定。4.2试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4.2.1水：GB/T6682中一级水。4.2.2DNA提取试剂盒。