微生物痕量基因残留测定 微滴数字PCR法 GBT 38485-2021.pdf

GB/T38485-2021微生物痕量基因残留测定微滴数字PCR法1范围本文件规定了用微滴数字PCR法测定微生物痕量基因残留(100pg/mL以下)的方法。本文件适用于加工产品中酿酒酵母和植物乳杆菌痕量特征基因残留(100pg/mL以下)的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实险室用水规格和试脸方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1痕量基因残留trace gene residue微生物加工产品在后续分离纯化中很难去除的痕量（含量在100pg/mL以下）核酸。4原理利用液滴微流控技术，将待测生物样品所残留的目标核酸PCR扩增体系分割成几十份到几万份包含一个拷贝的核酸分子微升级油包水微滴。按照常规PCR体系对其进行扩增，通过荧光探针实现信号读出。所产生微滴阳性信号的数目即代表了原始样本中目标核酸分子的拷贝数，从而直接数出目标核酸分子的个数，对起始样品的痕量基因残留进行定量。5试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5.1水为GB/T6682规定的一级水。将一级水在121下高压加热灭茵15min制备得到无菌水，5.2DNA提取试剂盒。5.3微滴数字PCR反应试剂盒。5.4引物和探针5.4.1单酒萨母引物和探针SC-F:5-GGACTCTGGACATGCAAGAT-3:SC-R:5-ATACCCTTCTTAACACCTGG-3:SC-P:5-FAM-CCCTTCAGAGCGTTTTCTCTAAATTGATAC-BHQ1-3