实验动物 钩端螺旋体检测方法 GBT 14926.46-2008.pdf

ICS65.020.30B44中华人民共和国国家标准GB/T14926.46一2008代替GB/T14926.46一2001实验动物钩端螺旋体检测方法Laboratory animal-Method for examination of Leptospira spp.2008-12-03发布2009-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T14926.46-20085.6.2生长良好的培养物用10000r/min离心30min,沉淀用PBS在相同条件下洗2次。5.6.3上述沉淀用PBS悬浮，超声波打碎后，10000r/min离心20min,上清即为ELISA抗原。5.7酶结合物：辣根过氧化物酶标记羊或兔抗犬1gG抗体，辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A(SPA)。5.8阳性血清：钩端螺旋体免疫SP犬所获得的血清，或自然感染犬后所获得的血清。5.9阴性血清：无钩端螺旋体感染犬血清。5.10培养基和试剂溶液的配制：参照GB/T14926.43和GB/T14926.50执行。6检测方法6.1显微镜凝集实验6.1.1检测程序检测程序见图1。血清倍比稀祥加入标准抗原37温箱2h结果判定凝集不凝集效价大于等于1：20阳性阴性结果报告图1检测程序6.1.2操作步骤6.1.2.1采样采血、分离血清。采样方法参照GB/T14926.42执行。6.1.2.2血清稀释参照表1进行。表1钩端螺旋体定量显微镜凝集试验操作方法凹孔板销号1457891012生理盐水/mL0.160.10.10.10.10.10.10.10.10.1待检血清/mL0.0470.1刀0.10.170.10.10.10.1入0.1入弃去0.1阴性血清/m0.1阳性血清/mL0.1标准抗原/mL0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1血清最终稀释度1/101/201/401/801/1601/3201/6401/12801/2560