蓝莓果腐病菌检疫鉴定方法 GBT 36815-2018.pdf

GB/T36815-2018蓝莓果腐病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了蓝莓果腐病菌的分离培养、致病性测定及分子生物学检测方法。本标准适用于蓝莓果腐病菌寄主种苗、植株和果实中蓝莓果腐病菌的检疫鉴定。2蓝莓果腐病菌的基本信息中文名：蓝莓果腐病菌学名：Diaporthe vaccinii Shear无性学名：Phomopsis vaccinii Shear N.E.Stevens&.HF.Bain英文名：fruit rot of blueberry,Phomopsis canker of blueberry,upright dieback of cranberry分类地位：蓝莓果腐病菌(Diaporthe vaccinii Shear)属真菌界(Fungi),子囊菌门(Ascomycota),子囊菌纲(Ascomycetes),间座壳目(Diaporthales).,间座壳科(Diapouthaceae)?,间座壳属(Dia porthe)。传播途径：病菌依靠带菌种苗和果实进行远距离传播。蓝莓果腐病菌的其他信息参见附录A。3方法原理病原菌的为害症状，分离培养性状、形态特征、致病性测定（参见附录A、附录B附录C)及ITS1/ITS4核酸序列比对结果作为蓝莓果腐病菌的检疫鉴定依据，4仪器用具和主要试剂4.1仪器用具4.1.1仪器体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平、高压灭菌锅、常规冰箱（一20），PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像仪、高速冷冻离心机、恒温水浴锅。4.1.2用具灭菌培养皿（直径90mm100mm)、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、接种针、一次性注射器(1mL)、棉纱、脱脂棉、酒精灯、塑料研杵、可调微量加样器。4.2主要试剂乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、Tris-HCl、氯仿、异戊醇、三氣甲烷、乙醇、氯化钾、氣化镁、蛋白酶K、引物ITS1/ITS4、Tag聚合酶等分子生物学试剂，或用植物组织及真菌基因组提取试剂盒提取DNA。葡萄糖、琼脂、青霉素、链霉素、乳酸，2.0%次氯酸纳(NCIO)。酸性马铃薯葡萄糖培养基(APDA,pH5.06.0)、APDA选择性培养基（制备方法参见附录D)。