牛肌肉、肝、肾中的α-群勃龙、β-群勃龙残留量的测定 液相色谱-紫外检测法和液相色谱-串联质谱法 GBT 20760-2006.pdf

1CS67.050X04B中华人民共和国国家标准GB/T20760一2006牛肌肉、肝、肾中的-群勃龙、阝-群勃龙残留量的测定液相色谱-紫外检测法和液相色谱-串联质谱法Method for the determination of a-trenbolone,B-trenboloneresidues in bovine muscle,liver and kidney-LC-UV method and LC-MS-MS method2006-12-31发布2007-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T20760-2006牛肌肉、肝、肾中的-群勃龙、阝群勃龙残留量的测定液相色谱-紫外检测法和液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了牛肌肉、肝、肾中。群勃龙、？群勃龙残留量的液相色谱紫外检测法和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛肌肉、肝、肾中一群勃龙、3群勃龙残留量的测定。本标准的方法检出限：样勃龙、B群勃龙的液相色谱-紫外检测法和液相色谱-串联质谱法的检出限均为2g/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括制误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T6379.1-2004,1S05725-1:1994,1DT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004，IS05725-2:1994,IDT)GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992，ncq1S03696:1987)3原理试样在pH=5.0条件下加酶水解，用乙酸乙酯提取群勃龙残留，经凝胶色谱净化仪(GPC)和硅胶柱净化，用配有紫外检测器的液相色谱仪或用液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙酸：色谱纯。4.3乙腈：色谱纯。4.4乙酸乙酯。4.5环已烷。4.6丙酮。4.7正己烷。4.8B葡萄糖苷酸酶和芳基硫酸酯(B-glucuronidase and aryl sulfatase)?:100000uni/mL。4.9乙酸乙酯+环己烷：50十50。4.10丙酮十正己烷：10十90。4.11丙酮+正己烷：30+70。4.12乙酸钠缓冲液：0.02mol/L,pH=5.0。称取无水乙酸钠0.82g溶于500mL水中，用乙酸调节pH=5.0。GB/T20760-20064.13a样勃龙、3群勃龙标准物质：纯度98%。4.14标准储备溶液：分别精确称取a-群勃龙、B群勃龙标准物质(4.13)各0.0100g,用乙腈(4.3)溶解并定容至100mL,配制成100g/mL的标准储备溶液。此溶液一18C冷冻保存，可使用六个月。4.15混合标准工作溶液：取标准储备溶液(4.14)各5mL至50mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成混合标准工作溶液，浓度为10gmL,此溶液一18冷冻保存，可使用三个月。4.16硅胶固相萃取柱：500mg,3mL:使用前用5mL丙酮十正己烷(4.10)预处理，保持柱体湿润。4.170.45m滤膜。5仪器和设备5.1液相色谱仪配有紫外检测器。5.2液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ES)。5.3凝胶色谱仪。5.4均质器。5.5旋转蒸发仪。5.6旋涡混合器。5.7离心机：最大转速5000r/min。5.8氮气浓缩仪。5.9恒温水浴摇床.6试样的制备与保存6.1试样的制备牛肌肉、肝、肾组织用组织捣碎机绞碎，分出0.5kg作为试样备用。6.2试样保存制备好的试样置于一18C冰柜中避光保存，7测定步骤7.1混合基质标准校准溶液的制备7.1.1试样的称取称取5个阴性样品，每个样品为5g(精确到0.01g),置于50L具塞离心管中，再分别加人不同量混合标准工作溶液(4.15)，使各被测组分的浓度均为2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100 ng/mL.7.1.2提取向上述盛有5个阴性样品的50mL具塞离心管中，加入5mL乙酸纳缓冲液(4,12)和20LB葡萄糖苷酸酶和芳基硫酸酯(4,8)，摇匀后盖好塞子置于恒温水浴摇床(5.9)上，37振荡水解过夜(5h)。待水解液冷却至室温后，加入20mL乙酸乙酯，在均质器(5.4)上以10000r/min的速度均质提取1min后，3000r/min离心(5.7)10min,将上清液过滤至鸡心瓶中。再用20mL乙酸乙酯重复提取一次，合并上清液于同一鸡心瓶中。7.1.3净化7.1.3.1凝胶色谱仪(GPC)条件a)净化柱：22gSX3 Bio-Beads填料，200目400目，200mm25mm(内径)或相当者：b)流动相：乙瘦乙脂十环己烷(50十50)，流速5.0mL/min；