鱼类检疫方法 第4部分：斑点叉尾鮰病毒(CCV) GBT 15805.4-2008.pdf

GB/T15805.4-2008鱼类检疫方法第4部分：斑点叉尾蛔病毒(CCV)1范围GB/T15805的本部分规定了用中和试验和PCR技术检测斑点叉尾铜病毒(CCV)的方法。本部分适用于CCV的分离与鉴定，斑点叉尾明病毒病的流行病学调查、诊断、监测以及口岸出入境、国内跨区域移动的检疫。2规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T15805的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T6682一1992分析实验室用水规格和试验方法(neq IS03696:1987)GB/T18088一2000出入境动物检疫采样3试剂和材料3.1水：GB/T6682-1992,一级。3.2CCV毒株和CCV的DNA:由农业部指定的动物病原微生物菌（毒）种保藏机构提供。3.3阴性对照：正常细胞组织悬液。3.4CCV参考抗血清。3.5Taq酶：一20保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。3.6dNTP(含dCTP,dGTP、dATP、dTTP各10mmoL/L).3.7引物：使用时浓度为40moLL。其序列如下：上游引物：5-TCA-TCC-GAA-TCC-GAC-AAC-TGA-3;下游引物：5-CCA-AGA-TCG-CGG-AGA-AAC-3。扩增目的基因中的136bp片段。3.8无水乙醇：分析纯，使用前预冷到一20C。3.9矿物油：要求无DNA酶和RNA酶。3.10DNA分子质量标准(Marker)。4器材和设备4.196孔细胞培养板。4.2微量移液器及吸头。4.3倒置显微镜。4.4恒温培养箱。4.5普通冰箱和低温冰箱。4.6组织研磨器。4.7离心机和离心管，