猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GBT 20743-2006.pdf

GB/T20743-2006猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的液相色普-串联质谱测定方法。本标准适用于猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定（本方法测定杆菌肽中主要成分杆菌肽A)。本标准的方法检出限：50.0g/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括恸误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T6379.1-2004,1S05725-1:1994,IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004，IS05725-2:1994,IDT)GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992，neq IS03696:1987)3原理试样中杆菌肽残留用酸化的甲醇水匀浆提取，经双硫踪三氯甲烷溶液进行液液分配净化后，再经固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2三氯甲烷：色谱纯。4.3甲酸。4.4双硫腙：优级纯。4.5杆菌肽标准物质：纯度92.0%。4.6甲醇+水(1+1)：量取250mL甲醇(4.1)与250mL水混合，4.70.3%甲酸溶液：移取3mL甲酸(4.3)于装有约800mL水的1L容量瓶中，用水定容至刻度并混匀。4.80.1%甲酸甲醇溶液：移取1mL甲酸于装有约800mL甲醇的1L容量瓶中，用甲醇定容至刻度并混匀。4.90.0025%双硫腙三氯甲烷溶液：称取0.025g双硫腙(4.4)于装有约800mL三氯甲烷(4.2)的1L容量瓶中，用三氯甲烷定容至刻度并混匀。4.10饱和双硫序三氯甲烷溶液：移取适量的0.0025%双硫腙三氯甲烷溶液于盛有约100mL甲醇十水(1十1)的250mL分液蒲斗中，派进1mn,静置分层，取下层溶液备用。4.11杆菌肽标准储备溶液：准确称取适量的杆茵肽于50mL容量瓶中，用0.1%甲酸甲醇溶液配制成浓度为0.1mg/mL的标准储备溶液。储备液在2C4保存，可用3个月。1GB/T20743-2006b)液相色谱梯度洗脱条件见表1：c)柱温：40C:d)进样量：20L。表1液相色谱梯度洗脱条件时间/min流速/(L/min)水（含0.3%甲酸）/(%)甲醇/(%)0.0040095.05.05.0040050.050.020.0040050.050.020.1040095.05.025.0040095.05.07.3.2质谱条件a)离子源：电喷雾离子源：b)扫描方式：正离子扫描：c)检测方式：多反应监测：d)电喷雾电压：5500V:e)碰撞气压力：410kPaD雾化气压力：690kPa:g)气帘气压力：410kPa:h)辅助加热气压力：690kPa:iD离子源温度：700：)定性离子对、定量离子对和去簇电压(DP)、聚焦电压(FP)、碰撞气能量(CE)及碰撞室出口电压(CXP)见表2。表2杆菌肽的定性离子对、定量离子对、去簇电压、聚焦电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压定性定量去簇聚焦碰撞气碰撞室名称离子对离子对电压(DP)/电压(P)/能量(CE)/出口电压(CXP)/(n/e)(m/e)WVV133712.3/227.2杆菌肽712.3/199.25290487712.3/356.24337.3.3液相色谱-串联质谱测定用5个不同浓度的杆菌肽基质标准工作溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中杆菌肽的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，杆菌肽的总离子图参见图A,1。杆菌肽的保留时间为8.49min。本方法的添加回收率数据参见表B.1。7.4平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验。7.5空白试验除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。