猪圆环病毒2型 病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法 GBT 34745-2017.pdf

GB/T34745-2017猪圆环病毒2型病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法1范围本标准规定了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型的技术要求。本标准用于检测猪圆环病毒2型核酸，适用于临床样品中猪圆环病毒2型的快速检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试险方法3缩略语下列缩咯语适用于本文件。Ct值：循环阈值(Cycle Threshold)DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid)EDTA:乙二肢四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic Acid)PBS:磷酸盐级冲溶液(Phosphate Buffer Saline)PCR:聚合链式反应(Polymerase Chain Reaction)PCV2:猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus Type2)PMWS:仔猪斯奶后多系统衰竭综合征(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome)Taq酶：Taq DNA聚合(Taq DNA Polymerase).tm值：解链温度(Melting Temperature)4试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂。所有试剂均用无RNA酶污染的容器（用DEPC水处理后高压灭菌)分装。4.1蛋白酶K(配制见附录A):一20保存。4.2裂解缓冲液（配制见附录A):4保存。4.3异硫氰酸弧裂解液（配制见附录A):4保存。4.4平衡酚（配制见附录A):4保存。4.5酚-氣仿-异戊醇(25：24：1)混合液（配制见附录A):4保存。4.6氣仿-异戊醇(24：1)（配制见附录A):4保存。4.7氯仿：常温保存。4.8异丙醇：常温保存。4.970%乙醇：用新开启的无水乙醇和灭菌去离子水配制（符合GB/T6682要求），一20预冷。