油菜茎基溃疡病菌活性检测方法 GBT 40627-2021.pdf

ICS65.020.01CCS B 16中华人民共和国国家标准GB/T40627-2021油菜茎基溃疡病菌活性检测方法Viability test of Leptosphaeria maculans(Desm)Ces.et De Not.2021-10-11发布2022-05-01实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会发布GB/T40627-2021油菜茎基溃疡病菌活性检测方法1范围本文件描述了应用普通荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜对油菜茎基遗疡病菌Leptosphaeriamaculans(Desm.)Ccs.et De Not.分生孢子进行活性检测的方法。本文件适用于油菜茎基溃疡病菌相关寄主中携带的油菜茎基遗疡病菌分生孢子的活性检测鉴定。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理应用荧光染料对油菜茎基溃场病菌分生孢子进行染色处理，根据碘化丙啶(Propidium lodide,PI)能够穿透正在死亡或者已经死亡的细胞膜，不能透过具有活力的细胞膜，使不具活性的孢子发出红色荧光、具有活性的孢子不发出荧光的特点，运用普通荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜对荧光染料处理的分生泡子进行检则，分析其活性情况。油菜茎基溃扬病菌基木信息见附录A。5仪器和试剂5.1试剂碘化丙啶(PI)溶液配置方法：称取0.01gP1粉末，加入10mL无菌水，配制成浓度为1mg/mL的母液，置于棕色瓶4避光保存，使用前配制所需浓度。马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):200g去皮土豆切成小方块，加入1000mL自来水，煮沸15mi,四层纱布过滤得到滤液，滤液中加入18g葡萄糖、18g琼脂粉，加热溶献后将溶液定容至1000mL,分装到三角瓶中，121高压蒸汽灭菌20min。5.2设备激光扫描共聚焦显微镜或普通荧光显微镜、高压灭菌锅、生物安全柜、生化培养箱、冰箱、离心机。6活性检测方法6.1检测样品制备在超净工作台中，用解剖针将油菜茎基溃疡病菌分生孢子挑到灭菌水中，充分振荡3m,在显微