小麦线条花叶病毒检疫鉴定方法 GBT 28103-2011.pdf

GB/T28103-20115.3试剂双抗体夹心酶联免疫吸附测定的检测试剂（见附录B)。反转录聚合酶链式反应检测试剂（见附录C)。植物病毒免疫电镜检测试剂（见SN/T1840)。6现场检测按照SN/T2122的规定进行检疫并抽取种子和种苗样品。7实验室检测对样品进行双抗体夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA),检验程序见附录B。对样品进行反转录聚合酵链式反应(RT-PCR)测定，检验程序见附录C,对样品进行植物病毒免疫电镜(IEM)测定，检验程序见SN/T1840。在电镜下观察到弯曲线状病毒粒子，测定其大小为15nm700nm,病毒粒子周围有抗体晕圈，则EM测定结果为阳性。否则IEM测定结果为阴性。8结果判定样品经过DAS-ELISA、RT-PCR测定或IEM测定，其两种或两种以上测定结果均为阳性，则判定该样品带有小麦线条花叶病毒。否则判定样品不带有小麦线条花叶病毒。9样品保存与结果记录9.1样品保存在适宜环境中保存已鉴定带有小麦线条花叶病毒的样品。如叶片应在超低温冰箱中单独保存或冻干保存：生长的苗木应在植物光照培养箱中单独培育；种子应在干燥条件下保存。9.2结果记录与资料保存记录各项数据，包括样品的种类、来源和样品状况，检测的时间、地点、方法和结果，测定人员的签字，DAS-ELISA的测定结果应保存吸光值数据报告，RT-PCR测定结果应保存电冰照片，IEM测定结果应保存病毒粒体照片，2