饲用植酸酶活性的测定 分光光度法 GBT 18634-2002.pdf

Gb/T18634-20025.4硝酸溶液：1+2水溶液。5.5100g九钼酸铵溶液：称取10g钼酸铵(NH,)Mo,O2:4H2O于100mL容量瓶中，加入1.0mL氨水(25%)用水溶解定容至划度。5.62.35g1钒酸铵溶液：称取0.235g钒酸铵(NH,VO,)于100mL棕色容量瓶中，加人2mL硝酸溶液(5.4)，用水溶解定容至刻度。避光条件下保存一周有效。5.7颜色终止液：移取2份硝酸溶液(5.4)，1份钼酸铵溶液(5.5)，1份钒酸铵溶液(5.6)混合后使用，现用现配。5.8植酸酶标准品（标明准确活性单位和类型）。5.9磷酸二氢钾(KHPO,):基准物。6仪器和设备6.1实验室常用仅器设备。6.2恒温水浴：(370.1)C。6.3分光光度计：有10mm比色皿，可在415nm下测定吸光度。6.4磁力搅拌器。6.5涡流式混合器。6.6酸度计：精确至小数点后2位。6.7离心机：转速为4000r/min以上。7试样制备取有代表性样品，用四分法将试样缩分至200g,植酸酶产品不需粉碎，配合饲料和添加剂预混合饲料需粉碎通过0.45mm标准筛，装入密封容器，防止试样成分变化。8测定步骤8.1绝对法（仲栽法）8.1.1标准曲线准确称取0.6804g在105C烘至恒重的基准磷酸二氢御(5.9)于100mL容量瓶中，用乙酸缓冲液(5.1)溶解，并定容至100mL,浓度为50.0mmol/L.按表1的比例稀释成不同浓度，与试样一起反应测定，以无机磷浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，列出直线回归方程(y=x十b)。表1标淮序号稀释量/mL浓度/(mmol/L)10.512520.5212.530.5-46.2540.5-83.1250.5161.56258.1.2试样溶液的制备按照附录A中建议的称样量称取试样两份，精确至0.0001g,置于100L容量瓶中，加入约70mL乙酸级冲液(5.1)”，一个磁力棒，在磁力搅拌器(6.4)上高速搅拌30mi,用乙酸缓冲液(5.1)定容至刻度（减去磁力棒的体积），摇匀，在离心机(6.7)上以4000r/min离心10min。分取不同体积的上清液用乙酸级冲液(5.1)稀释，使样液浓度保持在0.4U/mL左右，待反应。1)添加剂预混合饲料样品需采用乙酸缓冲液(5.2).