饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法 GBT 17812-1999.pdf

GB/T17812-1999前言饲料中维生素E的测定目前尚无国际标准，本标准是参照瑞士罗氏药品化学有限公司维生素研究部发表的饲料中维生素、类胡萝卜一现代分析方法中“用高效液相色谱法测定配合饲料、预混合饲料和浓缩维生素中的d-生育酚”而制定的。在技术内容上参照该法，在编写格式上依据GB/T1.1一1993标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定和GB/T1.4一1988标准化工作导则化学分析方法标准编写规定.为了使饲料中维生素E测定方法科学、准确、经济、实用，适合于我国不同实验室大量饲料样品的测定，在参照国外分析方法的基础上增加了反相色谱测定条件。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心（北京）负责起草。本标准主要起草人：陈必芳、赵小阳，李俊玲。GB/T17812-19994.9抗坏血酸乙醇溶液5g几：取0.5g抗坏血酸结品纯品溶解于4L温热的蒸馏水中，用乙醇稀释至100mL,临用前配制。4.10维生素E(d-a-生育酚)标准溶液4.10.1d-生育酚标准贮备液：准确称取d-a-生育酚纯品油剂(USP)100.0mg于100mL棕色容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，混匀，4C保存。该贮备液浓度每毫升含维生素E1.0mg。4.10.2d-Q-生育酚标准工作液：准确吸取d-a-生育酚贮备液(4.10.1)，用正已院(4.3)按1：20比例稀释。若用反相色谱测定，将1.00mLd-a-生育酚标准贮备液置入10L棕色小容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇(4.5)稀释至刻度，混匀，再按比例稀释。配制工作液浓度为每毫升含维生素E50g。4.11酚酞指示剂乙醇溶液：10g几。4.12氨气（纯度9.9%）.5仪器、设备5.1实验室常用设备。5.2圆底烧瓶，带回流冷凝器。5.3恒温水浴或电热套。5.4旋转蒸发器。5.5超纯水器（或全磨口玻璃蒸馏器）。5.6高效液相色谱仪，带紫外检测器。6试样的制备选取有代表性的饲料样品至少500g,四分法缩减至100g,磨碎，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。7分析步骤7.1试验溶液的制备7.1.1皂化称取试样配合饲料或浓缩饲料10g,精确至0.001g,维生素顶混料或复合预混料15g,精确至0.0001g.置入250mL圆底烧瓶中，加50mL抗坏血酸乙醇溶液(4.9)，使试样完全分散、浸湿，置于水浴上加热，混合直到沸点，用氨气吹洗稍冷却，加10mL氢氧化溶液(4.8)，混合均匀，在氨气流下沸腾皂化回流30min,不时振荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，分别用5mL乙醇、5mL水自冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶冷却至约40C。7.1.2提取定量的转移全部皂化液于盛有100mL乙醚(4.1)的500mL分液丽斗中，用30一50mL蒸馏水分23次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，加盖、放气，随后混合，激烈振荡2，静置、分层。转移水相于第二个分液漏斗中，分次用100、60mL乙醚重复提取两次，弃去水相，合并三次乙酰相。用蒸馏水每次100L洗涤乙醚提取液至中性，初次水洗时轻轻旋摇，防止乳化。乙醚提取液通过无水硫酸钠(4.7)脱水，转移到250mL棕色容量瓶中，加100 mg BHT(4.6)使之溶解，用乙醚定容至刻度(V)。以上操作均在避光通风柜内进行。7.1.3浓缩从乙醚提取液(Vx)中分取一定体积(V,)(依据样品标示量、称样量和提取液量确定分取量)置于旋转蒸发器烧瓶中，在部分真空，水浴温度约50C的条件下蒸发至干或用氮气吹干。残渣用正己烷溶解(反相色谱用甲醇溶解)，并稀释至10mL(Vm)使其获得的溶液中每毫升含维生素E(d-a-生育酚)50100g,离心或通过0.45m过滤膜过滤，收集清液移入2mL小试管中，用于高效液相色谱仪分析。2