饲料中维吉尼亚霉素的测定 高效液相色谱法 GBT 22261-2008.pdf

GB/T22261-2008量瓶中，用乙腈(4.5)溶解定容，摇匀，该溶液中维吉尼亚霉素浓度为1mg/L。贮存于4冰箱中，有效期三个月。4.13.3维吉尼亚霉素标准系列工作液：准确吸取维吉尼亚霉素标准心备液(4.13.2)置于棕色量瓶中，用流动相(4.12)配制成浓度分别为2,5、10、25、50,100g/mL的标准系列工作溶液。贮存于4冰箱中，有效期一周。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2分析天平：感量0.1mg。5.3涡旋混合器。5.4超声波水浴仪。5.5离心机：4000r/min。5.6氮吹仪：可控温50，5.7固相萃取柱5.7.1硅胶柱：690mg/3mL。5.7.2亲水亲脂平衡型固相萃取柱：60mg/3mL。5.8固相萃取装置。5.9pH计5.100.45m微孔滤膜。6试样制备6.1按GB/T14699.1采样。6.2选取有代表性饲料样品至少500g,按GB/T20195制备样品.7测定步骤7.1提取称取试样适量（配合饲料、浓缩饲料2g5g,预混料1g2g),精确至1mg,置于50mL离心管中，加2mL水，使试样充分湿润并混匀，加入20mL乙酸乙酯(4.1)，加盖，置涡旋混合器上混匀后，置超声波水浴中超声提取30min。于离心机上以4000r/min离心10min。准确吸取10mL上层乙酸乙酯清液于另一离心管中，加入5g无水硫酸钠(4.2)和10mL正己烷(4.3),置涡旋混合器上充分混匀后，于离心机上以4000r/min离心10min,上清液备用。7.2净化用2.5mL无水乙酸乙酯-正己烷(4.4)预淋洗活化硅胶柱(5.7.1)，将上清液(7.1)小心转移入硅胶柱内（保持过柱流速不超过2mL/mi,且不得抽千），用5mL无水乙酸乙酯-正己烷(4.4)洗涤离心管中无水硫酸钠，洗涤液一并转移人硅胶柱内，抽干，用2L乙腈(4.5)淋洗硅胶柱，抽干。用1mL甲醇(4.6)和1mL乙酸铵级冲溶液(4.7)预淋洗活化亲水亲脂平衡型固相萃取柱(5.7.2),将抽千的硅胶柱安装在亲水亲脂平衡型固相萃取柱(5.7.2)的上面，用5mL甲醇-乙酸铵缓冲溶液(4.8)淋洗硅胶柱，淋洗液正好通过亲水亲脂平衡型固相萃取柱(5.7.2)，保持过柱流速不超过2mL/min。淋洗完毕后，弃去硅胶柱，用5mL40%甲醇-水溶液(4.9)淋洗亲水亲脂平衡型固相萃取柱(5.7.2),弃去淋洗液。最后用5mL甲醇(4.6)进行洗脱，收集洗脱液，于50氨吹仪上蒸发至干，用0.5mL5mL的流动相(4.12)溶解残渣，过0.45m微孔滤膜，供上机测定。7.3色谱条件7.3.1色谱柱：Cs柱，长150mm,内径4.6mm,粒径5m,或相当者。2