饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法 GBT 17812-2008.pdf

GB/T17812-2008饲料中维生素E的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中维生素E的测定一高效液相色谱法。本标准第一法适用于配合饲料，浓缩饲料、复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素E(-生育酚)的测定，定量限为1mg/kg。本标准第二法适用于维生素预混合饲料中维生素E(生育酚乙酸酯)的测定，定量限为20mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备(GB/T603一2002，IS06353-1:1982,NEQ)GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008，IS03696:1987,M0D)GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1一2005,1S06497:2002,IDT)GB/T20195动物饲料试样的制备(GB/T20195一2006，IS06498:1998,IDT)3第一法皂化提取法（仲裁法）3.1原理用碱溶液皂化试验样品，使试样中天然生育酚释放出来，添加的-生育酚乙酸酯转化为游离的-生育酚，乙醚提取，蒸发乙醚，用正己烷溶解残渣。试液注入高效液相色谱柱，用紫外检测器在280nm处则定，外标法计算维生素E(d-a-生育酚)含量。3.2试剂和溶液除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中三级用水规定，色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定，溶液按照GB/T603配制。3.2.1碘化钾溶液：100g/1。3.2.2淀粉指示液：5gL。3.2.3硫代硫酸钠溶液：50g/L。3.2.4无水乙醚：不含过氧化物，3.2.4.1过氧化物检查方法：用5mL乙醚加1mL碘化钾溶液(3.2.1)，振摇1min,如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色，或加淀粉指示液(3.2.2)，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。3.2.4.2去除过氧化物的方法：乙醚用硫代硫酸钠溶液(3.2.3)振摇，静置，分取乙醚层，再用蒸馏水振摇，洗涤两次，重蒸，弃去首尾5%部分，收集馏出的乙醚，再检查过氧化物，应符合规定。3.2.5无水乙醇。3.2.6正已烷：色谱纯，GB/T17812-2008硫酸钠(3.2.10)脱水，转移到250mL棕色容量瓶中，加100 mg BHT(3.2.9)使之溶解，用乙酸定容至刻度(V)。3.6.1.3浓缩从乙醚提取液(V)中分取一定体积(V,)(依据样品标示量、称样量和提取液量确定分取量)置于旋转蒸发器烧瓶中，在部分真空、水浴温度约50的条件下蒸发至干或用氨气吹干，残渣用正己烷溶解(反相色谱用甲醇溶解)，并稀释至10mL(V,)使获得的溶液中每毫升含维生素E(d-生育酚)50g100g,离心或通过0.45m过滤膜过滤，用于高效液相色谱仪分析，3.6.2测定3.6.2.1色谱条件3.6.2.1.1正相色谱色谱柱：硅胶Lichrosorb Sie60,长125mm,内径4.6mm,粒度5m流动相：正己烷十1,4-二氧六环=97十3：流速：l.0mL/min温度：室温，进样量：20L检测器：紫外可调波长检测器（或二极管矩阵检测器），检测波长280m。3.6.2.1.2反相色谱色谐柱：C1s型柱，长125mm,内径4.6mm,粒度5m:流动相：甲醇十水=95十5：流速：1.0mL/min温度：室温；进样量：20L检测器：紫外可调波长检测器（或二极管矩阵检测器），检测波长280m。3.6.2.2定量则定按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数，向色谱柱注人相应的维生素E(-生育酚)标准工作液(3.2.15)和试样溶液(3.6.1.3)，得到色谱峰面积响应值，用外标法定量测定。3.6.2.3结果计算3.6.2.3.1试样中维生素E的含量(X),以质量分数国际单位（或毫克）每千克(IU或mg/kg)表示，按式(1)计算。X;=PXViXV:xa884884884884nnaa(】）P2 Xm XV2 Xf式中：P一试样溶液(3.6.1.3)峰面积值：V1一提取液(3.6.1.2)的总体积，单位为毫升(mL):V一试样溶液(3.6.1.3)最终体积，单位为毫升(mL):一标准工作液(3.2.15)浓度，单位为微克每毫升(g/mL):P一标准工作液(3.2.15)峰面积值：一试样质量，单位为克(g):V2一从提取液(V,)中分取的溶液体积，单位为毫升(mL)；f1一转换系数，1IU维生素E相当于0.909mgd-a生育酚，或1.0mgd-a生育酚乙酸酯。3.6.2.3.2平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。