饲料中4种巴比妥类药物的测定 GBT 23741-2009.pdf

GB/T23741-2009前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口，本标准主要起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（济南）。本标准主要起草人：李俊玲、李会荣、强莉、刘继明、门晓冬、李宏、杨志强。GB/T23741-2009饲料中4种巴比妥类药物的测定1范围本标准规定了饲料中巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥和司可巴比妥的高效液相色谱测定方法和液相色谱-串联质谱测定法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中4种巴比妥类药物的测定。高效液相色谱测定方法定量限为1mg/kg,液相色谱-串联质谱方法定量限为0.05mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008，IS03696:1987,MOD)GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1一2005，IS06497:2002,IDT)GB/T20195动物饲料试样的制备(GB/T20195一2006，IS06498:1998,IDT)3方法原理试样中的4种巴比妥类药物用三氯甲烷提取、过滤，滤液吹干后溶解过固相萃取小柱净化，洗脱液蒸干后用甲醇水溶解，在高效液相色谱仪上分离、测定，或在高效液相色谱-串联质谱仪上测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，实验室用水符合GB)T6682一级水的规定。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙腈：色谱纯。4.3三氯甲烷。4.4二氯甲烷。4.52%甲醇水溶液：取2mL甲醇与98mL水混合。4.6甲醇水溶液：1十1，4.7乙腈水溶液：30十70。4.8磷酸盐级冲液：c(Na:HPO,十NaH,PO,2H2O)=0.1mmol/L,pH=6.0。称取14.2g的无水磷酸氢二钠(Na2 HPO,),加水定容至1000mL,摇匀：另称取15.6g的磷酸二氢钠(NaH2 PO,2HO),加水定容至1000mL,摇匀。取上述两种溶液按123十877的比例混匀即可，4.9流动相：甲醇十水=45十55，4.10巴比妥，苯巴比妥、异戊巴比妥和司可巴比妥标准品：纯度99.0%。4.11标准贮备液：准确称取巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥和司可巴比妥标准品各25mg,分别用甲醇(4.1)溶解，定容至25mL,配成浓度为1mg/mL的标准贮备液。28冷藏保存，有效期三个月。4.12混合标准中间液：准确移取巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥和司可巴比妥贮备液(4.11)各5mL,用甲醇(4.1)定容至50L,该混合溶液中巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥和司可巴比妥的浓度均为100g/mL。2C8C冷藏保存，有效期一个月。GB/T23741-20094.13固相萃取小柱：亲水亲脂平衡固相萃取柱，3mL(60mg)。4.14滤膜：0.22m。4.15滤纸：快速，12.5cm。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。5.3天平：感量为0.0001g。5.4氮吹仪。5.5涡旋振荡器。5.6固相萃取仪。6试样制备按GB/T14699.1采样。选取有代表性饲料样品至少500g,按GB/T20195规定，制备通过0.45mm实验筛的试样。7试样处理7.1提取称取试料2g(精确至0.0001g)于100mL离心管中，准确加入25mL三氯甲烷(4.3)，涡旋振荡2min,过滤。准确移取滤液15mL于具塞试管中，40C氮吹至干，加入磷酸盐级冲液(4.8)3mL,涡旋溶解，备用。7.2净化固相萃取小柱分别用5L甲醇(4,1)、5mL水、5mL磷酸盐缓冲液(4.8)活化。取上述提取液(7.1)过柱，再分别用5mL威酸盐缓冲液(4.8)、5mL甲醇水溶液(4.5)淋洗，空气抽干30mn,用10mL二氣甲烷(4.4)洗脱，收集洗脱液，40C氨吹至干，准确移取1mL甲醇水溶液(4,6)溶解残渣，过0.22m滤膜后待测。8液相色谱测定8.1液相色谱条件色谱柱：Cs柱长250mm,内径4.6mm,粒径5m,或其他效果等同的C柱。柱温：室温。进样量：20L。流动相：甲醇十水=45十55。检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。检测波长：215nm,流速：1.0mL/min。8.2标准曲线的绘制取混合标准中间液(4.12)适量逐步稀释，用甲醇(4.1)定容，配制成浓度分别为0.5g/mL、1.0g/mL、5.0g/mL、10.0g/mL、20.0g/mL、50.0g/mL的混合标准工作液，浓度由低到高进样，根据峰面积和浓度计算回归方程。4种巴比妥类药物液相色谱条件下标准样品图谱参见图A.1。8.3定量测定试料溶液(7,2)上机测定，用单点或多点校准法进行定量。多点校准法定量，根据峰面积的响应值从标准曲线中得到待测样中4种巴比妥类药物的浓度（）：单点定量，根据样品峰面积的响应值与标准2