食品中黄曲霉毒素B1的测定 GBT 5009.22-2003.pdf

GB/T5009.22-2003E=4484681nns(1）c式中：E一重铬酸钾溶液的摩尔消光系数；A一测得重铬酸钾溶液的吸光度；c一重铬酸钾溶液的摩尔浓度。再以此平均值与重铬酸钾的摩尔消光系数值3160比较，即求出使用仪器的校正因素，按式(2)进行计算。f=3160E式中：F一使用仪器的校正因素：E一测得的重铬酸抑摩尔消光系数平均值。若f大于0.95或小于1.05，则使用仪器的校正因素可路而不计。3.14.2黄曲霉毒素B,标准溶液的制备：准确称取1mg1.2mg黄曲毒毒素B标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL,避光，置于4冰箱保存。该标准溶液约为10g/mL。用紫外分光光度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值。结果计算：黄曲露毒素B标准溶液的浓度按式(3)进行计算。X=AX MX1000 x f44440n4n940nnn944an(3）E2式中：X一黄曲霉毒素B标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(g/L):A一测得的吸光度值：f一使用仪器的校正因素：M一黄曲霉毒素B,的分子量312：E一黄曲霉毒素B,在苯-乙腈混合液中的摩尔消光系数19800。根据计算，用苯-乙睛混合液调到标准溶液浓度恰为10.0业g/L,并用分光光度计核对其浓度。3.14.3纯度的测定：取5L10g/mL黄曲霉毒素B标准溶液，滴加于涂层厚度0.25mm的硅胶G薄层板上，用甲醇-三氯甲烷(4十96)与丙围-三氯甲烷(8十92)展开剂展开，在紫外光灯下观察荧光的产生，应符合以下条件：3.14.3.1在展开后，只有单一的荧光点，无其他杂质荧光点，3.14.3.2原点上没有任何残留的荧光物质。3.15黄曲霉毒素B,标准使用液：准确吸取1mL标准溶液(10g/mL)于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于1.0g黄曲霉毒素B,。吸取1,0mL此稀释液，置于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液稀释至刻度，此溶液每毫升相当于0.2g黄曲霉毒素B。再吸取黄曲霉毒素B标准溶液(0.2g/mL)1.0mL置于5mL容量瓶中，加苯-乙晴混合液稀释至刻度。此溶液每毫升相当于0.04g黄曲霉毒素B,3.16次氯酸钠溶液（消毒用）：取100g漂白粉，加入500mL水，搅拌均匀。另将80g工业用碳酸钠(Na,CO:10H,O)溶于500mL温水中，再将两液混合、搅并，澄清后过滤。此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。所得溶液的浓度约为50gL。污染的玻璃仪器用10gL次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。4仪器4.1小型粉碎机。2GB/T5009.22-20034.2样筛。4.3电动振荡器。4.4全玻璃浓缩器。4.5玻璃板：5cmX20cm。4.6薄层板涂布器。4.7展开槽：内长25cm、宽6cm,高4cm。4.8紫外光灯：100W125W,带有波长365nm滤光片。4.9微量注射器或血色素吸管。5分析步骤5.1取样试样中污染黄曲毒毒素高的毒粒一粒可以左右测定结果，而且有毒毒粒的比例小，同时分布不均匀。为避免取样带来的误差，应大量取样，并将该大量试样粉碎，混合均匀，才有可能得到确能代表一批试样的相对可靠的结果，因此采样应注意以下几点。5.1.1根据规定采取有代表性试样。5.1.2对局部发霉变质的试样检验时，应单独取样。5.1.3每份分析测定用的试样应从大样经粗碎与连续多次用四分法缩减至0.5kg1kg,然后全部粉碎。粮食试样全部通过20目筛，混匀。花生试样全部通过10目筛，混匀。或好、坏分别测定，再计算其含量。花生油和花生酱等试样不需制备，但取样时应搅拌均匀。必要时，每批试样可采取3份大样作试样制备及分析测定用，以观察所采试样是否具有一定的代表性。5.2提取5.2.1玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、花生酱等5.2.1.1甲法：称取20.00g粉碎过筛试样（面粉、花生酱不需粉碎），置于250mL具塞锥形瓶中，加30L正己烷或石油碰和100mL甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一层水，盖严防漏。振荡30min,静置片刻，以叠成折叠式的快速定性滤纸过滤于分液福斗中，待下层甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一具塞锥形瓶内。取20.00L甲醇水溶液（相当于4g试样）置于另一125mL分液漏斗中，加20mL三氯甲烷，振摇2，静置分层，如出现乳化现象可滴加甲醇促使分层。放出三氣甲烷层，经盛有约10g预先用三氯甲烷湿润的无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于50mL蒸发皿中，再加5mL三氯甲烷于分液浦斗中，重复振摇提取，三氣甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并于蒸发皿中。将蒸发皿放在通风柜于65C水浴上通风挥干，然后放在冰盒上冷却2min3min后，准确加入1mL苯-乙腈混合液（或将三氯甲烷用浓缩蒸馏器减压吹气蒸干后，准确加人1mL苯-乙腈混合液)。用带橡皮头的滴管的管尖将残渣充分混合，若有苯的结品析出，将蒸发皿从冰盒上取出，继续溶解、混合，晶体即消失，再用此滴管吸取上清液转移于2L具塞试管中。5.2.1.2乙法（限于玉米、大米、小麦及其制品）：称取20.00g粉碎过筛试样于250mL具塞锥形瓶中，用滴管滴加约6mL水，使试样湿润，准确加入60mL三氯甲烷，振荡30mi,加12g无水硫酸钠，振摇后，静置30mi,用叠成折叠式的快速定性滤纸过滤于100mL具塞锥形瓶中。取12mL滤液（相当4g试样)于蒸发皿中，在65C水浴上通风挥干，准确加入1mL苯-乙腈混合液，以下按5.2.1.1自“用带橡皮头的滴管的管尖将残渣充分混合”起依法操作。5.2.2花生油、香油、菜油等称取4.00g试样置于小烧杯中，用20mL正已烷或石油醚将试样移于125mL分液漏斗中。用20mL甲醇水溶液分次洗烧杯，洗液一并移入分液漏斗中，辰摇2m,静置分层后，将下层甲醇水溶液移入第二个分液漏斗中，再用5mL甲醇水溶液重复振摇提取一次，提取液一并移入第二个分液漏斗中，在第二个分液漏斗中加人20mL三氣甲烷，以下按5.2.1.1自“振摇2min,静置分层”起依法3