食品中维生素B6的测定 GBT 5009.154-2003.pdf

ICS67.040C53B中华人民共和国国家标准GB/T5009.154一2003代替GB/T17407一1998食品中维生素B。的测定Determination of vitamin Be in foods2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会发布GB/T5009.154-20035分析步骤5.1菌种的制备及保存（避光处理）5.1.1以卡尔斯伯酵母菌(Saccharomyces Carlsbergens is ATCC No.9080简称SC)纯菌种接入2个或多个琼脂培养基管中，在30C士0.5C恒温箱中保温18h20,取出于冰箱中保存，至多不超过两星期。保存数星期以上的菌种，不能立即用作制备接种液之用，一定要在使用前每天移种一次，连续2d3d,方可使用，否则生长不好。5.1.2种子培养液的制备加0.5mL50ng/mL的维生素B:标准应用液于尖头管中，加入5.0mL基本培养基，塞好棉塞，于高压锅121下消毒10min,取出，置于冰箱中，此管可保留数星期之久。每次可制备2管4管。5.2试样处理（整个步骤需要避光）5.2.1称取试样0.5g10.0g(维生素B,含量不超过10ng)放入100mL三角瓶中，加72mL0.22mol/1硫酸。放人高压锅121C下水解5h,取出冷却，用10.0mol/L氢氧化钠和0.5mol/L硫酸调pH值至4.5，用溴甲酚绿做指示剂。（指示剂由黄-黄绿色），将三角瓶内的溶液转移到100mL容量瓶中，用蒸骝水定容至100L,滤纸过滤，保存滤液于冰箱内备用（保存期不超过36h),5.2.2接种液的制备使用前一天，将卡尔斯伯酵母菌菌种由储备菌种管移种于已消毒的种子培养液中，可同时制备两根管，在30C0.5的恒温箱中培养18h20h。取出离心10min(3000r/min)倾去上部液体，用已消毒的生理盐水淋洗2次，再加10mL消毒过的生理盐水，将离心管置于液体快速混合器上混合，使菌种成为混悬体，将此液倒入已消毒的注射器内，立即使用。5.2.3标准曲线的制备取标准储备液2.00mL稀释至200mL成为中间液，从中间液中取5.00mL稀释至100mL作为工作液，浓度为50ng/mL,3组试管各加0.00,0.02,0,04,0.08,0.12和0.16mL工作液，再加5.00mL吡哆醇Y培养基，混匀，加棉塞。5.2.4试样管的制备在试管中分别加入0,05,0.10,0.20mL样液，再加入5.00L吡必醇Y培养基，用棉塞塞住试管，将制备好的标准曲线和试样测定管放入高压锅121C下高压10mi,冷至室温备用。5.2.5接种和培养每管种一滴接种液，于30C土0,5C恒温箱中培养18h一22h。5.3测定将培养后的标准管和试样管从恒温箱中取出后，用分光光度计于550m波长下，以标准管的零管调零，测定各管的吸光度值。以标准管维生素B,所含的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制维生素B:标准工作曲线，用试样管得到的吸光度值，在标准曲线上查到试样管维生素B,的含量。6结果计算试样中的维生素B,含量按下式计算：X=X VX 100mX105c=十2十3式中：X一试样中维生素B,的含量，单位为毫克每百克(mg/100g)。c一试样提取液中维生素B,的浓度，单位为纳克每毫升(g/mL)。