高效液相色谱-荧光检测法测定化妆品中α-三联噻吩_陈桂琴.pdf

第 32 卷，第3 期2023 年3 月化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGEVol.32,No.3Mar.2023高效液相色谱-荧光检测法测定化妆品中-三联噻吩陈桂琴，张小媚（广东省药品检验所国家药监局化妆品风险评估重点实验室，广州510663）摘要采用高效液相色谱-荧光检测法测定化妆品中-三联噻吩。样品经甲醇超声提取20 min，以C18色谱柱进行分离，以乙腈-水（体积比为85 15）为流动相进行洗脱，用荧光检测器测定，色谱峰面积外标法定量。-三联噻吩的质量浓度在5200 ng/mL范围内与色谱峰面积具有良好的线性关系，相关系数（r）为0.999 9，方法的检出限为10 ng/g。以霜类、乳液类、水剂类及液态油基类 4 种空白基质进行加标回收试验，在 3 种不同加标水平下，回收率为94.6%98.6%，测定结果的相对标准偏差为0.6%2.2%（n=6）。该方法样品处理简便、快捷，分析灵敏度高，可用于化妆品中-三联噻吩的检测。关键词高效液相色谱法；荧光检测器；化妆品；-三联噻吩中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008-6145(2023)03-0034-05Determination of-terthiophene in cosmetics by HPLC with fluorescence detectorCHEN Guiqin,ZHANG Xiaomei(Guangdong Institute for Drug Control,NMPA Key Laboratory for Safety Risk Assessment of Cosmetics,Guangzhou510663,China)Abstract-Terthiophene in cosmetics was determined by high performance liquid chromatography(HPLC)with fluorescence detector.The samples were extracted with methanol for 20 min,separated with C18 chromatography column,eluted with acetonitrile water(8515)as mobile phase,determined with fluorescence detector,and quantified with external standard method of chromatographic peak area.The mass concentration of -terthiengl had a good linearity with the chromatographic peak area in the range of 5-200 ng/mL,the correlation coefficient was 0.999 9,and the detection limit of the method was 10 ng/g.Four blank samples of frost,lotion,water agent and liquid oil were used as the matrix for the recovery test.Under three different addition levels,the recoveries were 94.6%-98.6%,and the relative standard deviations of determination results were 0.6%-2.2%(n=6).The results show that the method is simple,rapid,sensitive,which can be used for the determination of-terthiophene in cosmetics.Keywords HPLC;fluorescence detector;cosmetics;-terthiophene-三联噻吩(又称为-T)是一种光敏化合物，广泛存在于菊科植物中，尤其万寿菊属中12，它对蚊幼虫、蝇幼虫和其它的昆虫具有强烈的光活化毒杀作用，作为新型植物杀虫剂在农业广泛应用35。万寿菊、小万寿菊及孔雀草是常见的几种万寿菊属植物，这几种植物的相关提取物作为化妆品原料列于国际化妆品原料标准中文名称目录6，包含万寿菊花提取物、万寿菊花油、小万寿菊花油、孔雀草花/叶/茎提取物等，这几种原料常作为香精成分，广泛地运用于香水及其它化妆品中。因为万寿菊、小万寿菊及孔雀草植物中含有-三联噻吩，其相关提取物/油作为化妆品原料可能产生光毒性的安全问题，欧盟消费者安全科学委员会(SCCS)及其前身欧盟消费者科学委员会(SCCP)对其进行了一系列安全性评估。早在2005年，欧盟消费品科学委员会(SCCP)发布评估意见SCCP/0869/05提出，万寿菊提取物/油具有光毒性，由于没有得到证实的安全使用限值，建议化妆品中不要使用万寿菊、小万寿菊、孔雀草提取物/油。2018年，根据SCCS的评估意见，欧盟委员会公布了欧盟化妆品法规2018/978号修订案7，将doi:10.3969/j.issn.1008-6145.2023.03.008基金项目广东省药品监督管理局科技创新项目（2022TDZ10）通信作者陈桂琴，硕士，主要从事化妆品检测技术研究工作收稿日期20230210引用格式陈桂琴，张小媚.高效液相色谱-荧光检测法测定化妆品中-三联噻吩 J.化学分析计量，2023，32（3）：34.CHEN Guiqin,ZHANG Xiaomei.Determination of-terthiophene in cosmetics by HPLC with fluorescence detectorJ.Chemical Analysis and Meterage,2023,32(3):34.34陈桂琴，等：高效液相色谱-荧光检测法测定化妆品中-三联噻吩万寿菊花提取物和花油列入化妆品法规禁用物质清单；将小万寿菊和孔雀草花提取物/花油列入化妆品法规限用物质清单中，设置这两种原料在驻留类和冲洗类化妆品中的质量分数分别不超过0.01%和0.1%，并设定了其原料中-三联噻吩的质量分数不大于0.35%等限制使用条件。在我国，孔雀草提取物和油等相关原料未收录在 已使用化妆品原料名称目录(2015版)8中，而万寿菊花提取物和小万寿菊花油列于目录中。2021年，参考欧盟化妆品评估和法规调整情况，我国将万寿菊花提取物、万寿菊花油纳入禁用组分表。目前，新发布的 已使用化妆品原料名称目录(2021版)仍然将小万寿菊花油列于其中，但并未对其在化妆品中使用限制条件做出规定。据文献报道，鲤肠、深裂刺头菊等植物中存在含量较高的-三联噻吩9，而这些植物的相关部位的提取物，如鳢肠提取物、鳢肠叶粉、鳢肠叶提取物、鳢肠提取物等也收纳在 已使用化妆品原料名称目录(2021版)中，这些原料在化妆品中使用存在一定的安全风险。通过文献调研，我国目前尚无化妆品中-三联噻吩法定测定方法和限值标准，化妆品中-三联噻吩的检测方法鲜有文献报道。为了更好的服务监管，保障消费者的健康，有必要建立化妆品中-三联噻吩的检测方法。部分文献报道了植物中-三联噻吩的含量检测方法，包括荧光分光光度法10、气相色谱法11、高效液相色谱法1213、高效液相色谱-质谱联用法14等。中华人民共和国药典(2020 年版)一部收载了禹州漏芦中-三联噻吩含量的测定方法15，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1%乙酸溶液为流动相，使用紫外检测器检测-三联噻吩含量。-三联噻吩本身具有荧光特性，在一定波长的光照下可以发出黄绿色荧光。-三联噻吩在植物中含量较低，一般植物提取物添加到化妆品含量也很低，所以对-三联噻吩检测方法要求灵敏度高，能够检测化妆品中痕量水平的-三联噻吩。笔者采用超声萃取-高效液相色谱法测定化妆品中-三联噻吩，用荧光检测器测定，该方法样品处理简单、快速，测定结果准确、可靠。1实验部分1.1主要仪器与试剂超高效液相色谱仪：SHIMADZU LC-20AT型，配荧光检测器、二极管阵列检测器，日本岛津仪器有限公司。超声波清洗器：S300H型，德国Elma公司。超纯水发生器：Milli Q Reference型，美国密理博公司。电子天平：XS205DU型，感量为0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司。-三联噻吩对照品：质量分数为99.0%，源叶生物科技有限公司。乙腈、甲醇：均为色谱纯，霍尼韦尔贸易(上海)有限公司。正己烷、丙酮、冰乙酸：均为分析纯，广州化学试剂厂。化妆品样品：万寿菊精油小滚珠18号、野生埃及万寿菊单方精油、万寿菊祛痘凝胶，市售。1.2标准溶液的配制准确称取-三联噻吩对照品10 mg(精确至0.01 mg)，置于20 mL 棕色容量瓶中，用少量丙酮溶解，甲醇定容至标线，摇匀，配制成-三联噻吩标准储备溶液。用甲醇将-三联噻吩标准储备溶液逐级稀释成质量浓度分别为5、10、20、50、100、200 ng/mL 的-三联噻吩系列标准工作溶液。1.3色谱条件色谱柱：Phenomenex Titank C18柱(250 mm4.6 mm，5 m，美国菲罗门公司)；流动相：乙腈水(85 15，体积比，下同)，流量为1.0 mL/min；荧光检测波长：激发波长为352 nm，发射波长为428 nm；柱温：30；进样体积：5 L。1.4样品处理称取化妆品样品0.5 g(精确到0.1 mg)，置于10 mL具塞比色管中，加入3 mL 甲醇，涡旋30 s，使样品分散均匀，用甲醇定容至标线，超声提取20 min，静置至室温，用0.22 m尼龙66 滤膜过滤后，滤液作为样品溶液备用。2结果与讨论2.1色谱条件的选择2.1.1检测器的选择中华人民共和国药典(2020年版)一部收载了禹州漏芦中-三联噻吩含量的测定方法9，使用紫外检测器，检测波长为352 nm。-三联噻吩具有荧光特性，在一定波长的光照下可发出黄绿色荧光。王玉健等5利用荧光分光光度法测定-三联噻吩，最大激发波长为352 nm，最大荧光发射波长为428 35化学分析计量2023 年，第 32卷，第 3 期nm。本实验采用高效液相色谱法，配置荧光检测器及二极管阵列检测器，在同等色谱条件下测定-三联噻吩，其中荧光检测器设置激发波长352 nm，发射波长428 nm，二极管阵列检测器设置检测波长为352 nm。结果表明，使用荧光检测器获取的-三联噻吩方法检出限为0.5 ng/mL，使用二极管阵列检测器获取的方法检出限为为100 ng/mL，可见荧光法检出限更低，灵敏度高，可用于检测样品中的痕量-三联噻吩。由于荧光检测法同时设定了特征的激发波长和发射波长，能够有效排除其它物质的干扰，选择性好，准确度高。综上所述，本实验选择荧光检测器作为检测器。2.1.2流动相选择参考文献9-10,14-15，分别选择甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%乙酸溶液、甲醇-0.1%乙酸溶液4种流动相，考察其对色谱分离的影响。结果表明，4种流动相下的色谱峰形均良好。本实验选择乙腈-水作为流动相，目标物峰形良好，基线平稳，拖尾因子较小，且保留时间适中。2.1.3色谱柱及柱温的选择为了考察不同色谱柱的-三联噻吩出峰情况，分别选取了Phenomenex Titank C18 柱(250 mm 4.6 mm，5 m)、CAPCELL PAK C18 MG柱(250 mm 4.6 mm，5 m)、CAPCELL PAK C18 UG120 柱(250 mm4.6 mm，5 m)三种型号色谱柱对-三联噻吩标准储备溶液和样品溶液进行测定。结果表明，Phenomenex Titank C18 柱的色谱峰形对称、尖锐，保留时间适中，因