水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 GBT 19857-2005.pdf

GB/T19857-2005前言本标准的附录A为资料性附录本标准由全国水产标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、厦门出入境检验检疫局、广东出入境检验检疫局、福建出入境检脸检疫局、江苏出入境检验检疫局、北京出人境检验检疫局、宁波出入境检验检疫局。本标准主要起草人：郭德华、施冰、杨惠琴、林峰、李波、张志刚、林海丹、王传现、陈鹭平、盛永刚、李耀平、杨芳、陈惠兰、张朝辉、殷居易、林立毅、袁辰刚。本标准系首次发布的国家标准。GB/T19857-2005水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定1范围本标准规定了水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿(leucomalachite green)、结品紫及其代谢物隐色结晶紫(leucocrystal violet).残留量的液相色谱-串联质谱和高效液相色谱的测定方法。本标淮适用于鲜活水产品及其制品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿、结品紫及其代谢物隐色结品紫残留量的检验。2液相色谱-串联质谱法2.1原理试样中的残留物用乙腈-乙酸铵缓冲溶液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷层，经中性氧化铝和阳离子固相柱净化后用液相色谱串联质谱法测定，内标法定量。2.2试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。2.2.1乙腈：液相色谱纯。2.2.2甲醇：液相色谱纯。2.2.3二氯甲烷。2.2.4无水乙酸铵。2.2.55mol/L乙酸铵缓冲溶液：称取38.5g无水乙酸铵溶解于90mL水中，冰乙酸调pH到7.0，用水定容至100mL。2.2.60.1mol/L乙酸铵缓冲溶液：称取7.71g无水乙酸铵溶解于1000mL水中，冰乙酸周pH到4.5，2.2.75mmo/L乙酸铵缓冲溶液：称取0.385g无水乙酸铵溶解于1000mL水中，冰乙酸调pH到4.5,过0.2m滤膜。2.2.8冰乙酸。2.2.90.25g/mL盐酸羟胺溶液。2.2.101.0mol/L对-甲苯磺酸溶液：称取17.2g对-甲苯磺酸，用水溶解并定容至100mL。2.2.11体积分数为2%的甲酸溶液。2.2.12体积分数为5%的乙酸铵甲醇溶液：量取5mL乙酸铵缓冲溶液(2.2.5)用甲醇定容至100mL.2.2.13阳离子交换柱：MCX,60mg/3mL,使用前依次用3mL乙腈、3mL甲酸溶液(2.2.11)活化。2.2.14中性氧化铝柱：1g/3mL,使用前用5mL乙腈活化。2.2.15标准品：孔雀石绿(MG)、隐色孔雀石绿(LMG)、结晶紫(CV)、隐色结品紫(LCV)、同位素内标氘代孔雀石绿(D5-MG)、同位素内标氘代隐色孔雀石绿(D.-LMG),纯度大于98%。2.2.16标准储备溶液：准确称取适量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、氘代孔雀石绿、氘代隐色孔雀石绿标准品，用乙腈分别配制成100g/mL的标准储备液。2.2.17混合标准储备溶液(1g/mL):分别准确吸取1.00mL孔雀石绿、结品紫、隐色孔雀石绿和隐色结品紫的标准储备溶液(2.2.16)至100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，1mL该溶液分别含1g的孔雀石绿、结品紫、隐色孔雀石绿和隐色结品紫。一18避光保存，GB/T19857-2005相色谱-串联质谱测定。2.5测定2.5.1液相色谱-串联质谱条件a)色谐柱：C1s柱，50mm2.1mm(内径)，粒度3m:b)流动相：乙腈十5mmol/L乙酸铵=75+25（体积比）：c)流速：0.2mL/min:d)柱温：35：e)进样量：l0LD离子源：电喷雾ESI,正离子：g)扫描方式：多反应监测MRM;h)雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气，使用前应调节各气休流量以使质谱灵敏度达到检测要求：)喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度：j)监测离子对：孔雀石绿m/z329/313(定量离子)、329/208：隐色孔雀石绿m/z331/316(定量离子)、331/239：结晶紫m/z372/356(定量离子)、372/251：隐色结晶紫m/z374/359(定量离子)、374/238：氘代孔雀石绿m/z334/318(定量离子)；氘代隐色孔雀石绿m/z337/322(定量离子)。2.5.2液相色谱-串联质谱测定按照2.5.1液相色谱-串联质谱条件测定样品和混合标准工作溶液(2.2.20)，以色谱峰面积按内标法定量，孔雀石绿和结品紫以氘代孔雀石绿为内标物计算，隐色孔雀石绿和隐色结品紫以氘代隐色孔雀石绿为内标物计算。在上述色谱条件下孔雀石绿、氘代孔雀石绿，结晶紫、氘代隐色孔雀石绿、隐色孔雀石绿和隐色结品紫的参考保留时间分别为2.27min、2.30min,2.88min、5.21min、5.31min、5.61min,标准溶液的离子流图参见附录A中图A.1。2.5.3液相色谱-串联质谱确证按照2.5,1液相色谱-串联质普条件测定样品和标准工作溶液，分别计算样品和标准工作溶液中非定量离子对与定量离子对色谱峰面积的比值，仅当两者数值的相对偏差小于25%时方可确定两者为同一物质。2.6空白试验除不加试样外，均按2.4,2.5步骤进行。2.7结果计算和表述按式(1)计算样品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结品紫和隐色结品紫残留量。计算结果需扣除空白值。X=XGXAXAXV4n9nn(1）cXA;X A.Xm式中：X一样品中待测组分残留量，单位为微克每千克(g/kg):一孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫标准工作溶液的浓度，单位为微克每升(g/1)c。一标准工作溶液中内标物的浓度，单位为微克每升（g/L):c一样液中内标物的浓度，单位为微克每升(g/L)；A一孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结品紫或隐色结品紫标准工作溶液的峰面积；A一样液中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结品紫或隐色结品紫的峰面积；A一标准工作溶液中内标物的峰面积：