桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素的检测 高效液相色谱法 GBT 40642-2021.pdf

GB/T40642-20215.1试剂5.1.1乙腈(C.HN),色谱纯。5.1.2冰乙酸(CH,COOH).5.1.3苏甲氧酰张氯(C,H.CO2)。5.1.4甘氨酸(C.H:NO2)。5.1.5硼酸钾缓冲液，pH8.5。5.2溶液配制苏甲氧酰氯FMOC-C1乙腈溶液：称取0.065 g FMOC-C1,精确至0.001g,用乙腈溶解，并定容至50mL,得到5mmol/L的FMOC-CI乙腈溶液。FMOC-CI乙腈溶液应现配现用。5.3标准品1-脱氧野尻霉素标准品，纯度98%。5.41-脱氧野尻雷素标准储备溶液称取100mg(精确至0.001g)1-脱氧野尻霉素标准品，置于100mL容量瓶中，用0.01mol/L盐酸水溶液溶解并定容至刻度线，混匀。5.51-脱氧野尻霉素标准工作溶液将1-脱氧野尻霉素标准诸备溶液用盐酸水溶液稀释制备一系列标淮溶液，标准液浓度分别为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.06mg/mL、0.08mg/mL、0.10mg/mL,临用时配制。5.6材料滤膜，孔径0.45m有机相滤膜。6仪器与设备6.1分析天平：灵敏度万分之一克。6.2超声振荡器/超声清洗器：超声频常40kHz80kHz。6.3高效液相色谱仪：包含紫外检测器或二极管检测器、色谱工作站。6.4恒温水浴锅。7检测方法7.1样品处理称取桑叶提取物0.100g试样，精确至0.001g,用0.010mol/L盐酸水溶液超声辅助溶解15min,冷却至室温后，定容至50mL,得到试样溶液。7.2衍生化反应取标准品或试样溶液100L置于1.5mL的离心管中，依次加入0,4mo/L的硼酸钾缓冲溶液(pH8.5)175L和5mmol/L衍生化试剂FMOC-C1乙腈溶液250L,充分混合30s,在25恒温水2GB/T40642-2021浴下反应25min,然后加人0.1mol/L甘氨酸溶液100L用于中和过量的FMOC-Cl,反应20min,再加人75L体积分数为1%乙酸水溶液和300L去离子水，待反应结束后，用0,45：有机相滤膜微滤，得到衍生后的样品溶液。样品溶液避光保存备用。7.3测定条件按照制造商操作手册运行高效液相色谱仪：以下色谱分析条件可供参考，采用其他条件应险证其适用性。色谐条件如下：一色谱柱：RP-C18(250mmX4.6mmi.d,5m);一流动相：乙腊-01%乙酸水溶液(32：68，休积比)：一流速：l.0ml/min柱温：30；进样量：10L一检测波长：254nm。7.4标准曲线绘制按7.3色谱条件检测，分别吸取不同浓度标准工作溶液并按照7.2进行衍生化反应，吸取衍生后的样品溶液10L,进样于高效液相色谱仪，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应的样品溶液浓度为横坐标，进行线性回归得到标准曲线方程。1-脱氧野尻霉素标准品的HPLC色谱图参见附录A。7.5试样测定按73的色谱条件，取7,2步骤中衍生后的样品溶液进样，得到试样溶液的峰面积，根据保留时间和1-脱氧野尻霉素标准品色谱图定性。从标准曲线上查得试样溶液中1-脱氧野尻霉素的含量。试样溶液中1-脱氧野尻霉素的响应值应在标淮曲线的线性范围内，超过线性范围则应将试样溶液稀释后测定或增加提取物的质量重新检测。8结果计算与表示8.1结果计算桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素含量按式(1)进行计算：X=XV式中：X一样品中1-脱氧野尻霉素的含量，单位为毫克每克(mg/g):c一样品中1-脱氧野尻霉素的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL):V一最终定容后样品的体积，单位为毫升(mL):m一试样的质量，单位为克(g)。8.2结果表示计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留至小数点后两位有效数字，3