实验动物 近交系小鼠、大鼠免疫标记检测法 GBT 14927.2-2008.pdf

GB/T14927.2-2008体重注射0.1mL。因不同品系动物对麻醉剂敏感性不同，注射量可适当增减（手术时室温应控制在25C28C之间).2.2.2.5待动物麻醉失去知觉后，将其背部朝上放在固定板上，固定动物，剪去被毛，并用3%碘酒棉球和75%酒精棉球消毒。2.2.2.6在背部剪下直径5mm10mm的皮肤左右各一块（其中一块用做自体移植，另一块用做异体移植)。2.2.2.7将剪好的皮片翻转过来放入带少量生理盐水的双碟（直径为6m)中，用眼科剪刀，轻轻地切去皮下组织至直皮，然后放在无菌生理盐水中冲洗一下。2.2.2.8两只动物的皮片，除左侧皮片做自体移植外，右侧皮片循环交换，逆毛方向移植并使之吻合。2.2.2.9覆盖涂过凡士林和青霉素G钠的纱布块，3层4层，用1m宽橡皮膏固定，松紧适度。2.2.2.10手术结束待动物苏醒后，把动物放入鼠盒内，并挂上标记卡片，10d后拆除包扎。2.2.3结果观察2.2.3.1拆包后，发现皮片干瘪、脱落则为技术失败。如皮片脱痂，手术部位平整、一周后有新毛长出则为手术成功。对照自体移植，技术失败率不得大于10%。2.2.3.2如果皮片在2周3周内脱落，则为急性排斥。遗传污染通常引起急性排斥。2.2.3.3如果皮片在3周脱落，则为慢性排斥。移植物有否慢性排斥至少观察100d,遗传突变通常引起慢性排斥。2.2.3.4如果对结果怀疑，则要进行重新移植，可以使用一批新的动物，也可以使用已做过移植但对结果产生怀疑的动物。如果是后者，则排斥更迅速、更典型。2.3尾部皮肤移植法2.3.1设备和材料2.3.1.111号手术刀柄。2.3.1.211号手术尖刀片。2.3.1.3玻璃套管（直径8mm,大鼠可适当大些）。2.3.1.4其他材料见2.2.1。2.3.2操作步骤2.3.2.1随机取同性别4周龄一8周龄的动物10只，动物可来自于基础群、血缘扩大群或生产群。2.3.2.2每只动物分别编号并称取体重，详细记录品系名称、性别、出生年月日、谱系及其他特征。2.3.2.3用无菌生理盐水配制0.7%戊巴比妥钠溶液。2.3.2.4采用腹腔注射麻醉0.7%戊巴比妥钠溶液动物，小鼠每10g体重注射0.1mL,大鼠每20g体重注射0.1mL。因不同品系动物对麻醉剂敏感性不同，注射量可适当增减（手术时室温应控制在25C28C之间).2.3.2.5待动物麻醉失去知觉后，将5只一组按顺序采取仰卧式放在一块滤纸上，并用3%碘酒棉球和75%酒精棉球消毒鼠尾。2.3.2.6用左手食指按住动物尼根，左手拇指按住尾尖，固定鼠尾并使其微微伸展，然后右手持解剖刀，刃面朝上，与尾部皮肤成2030夹角，在尾静脉上部或两条尾静脉之间，在离尾部5mm处削下一片宽约2mm3mm,长约7mm8mm的皮肤，其厚度前者以没有严重出血，后者能足以暴露出白色的肌腱但又不割伤血管为宜。2.3.2.7右手将刀片逆时针方向交给左手，附着在刀片上的皮片相应转180，将皮片用眼科极子取下贴在原创面上，并尽量使其吻合，用一小片滤纸覆盖，再轻轻按压一下，然后取掉滤纸片，该移植作为自体移植对照。2.3.2.8按照2.3.2.6和2.3.2.7步骤，完成另4只动物的自体移植对照。2.3.2.9按照2.3.2.6和2.3.2.7步骤，参照皮肤移植相互循环系统图示，进行循环皮肤移植。亦即2