尿液中Δ9-四氢大麻酸的测定 液相色谱-串联质谱法 GBT 37272-2018.pdf

GB/T37272-2018k)”四氢大麻酸对照品工作溶液：试验中所用其他浓度的对照品溶液均从上述对照品溶液用甲醇稀释得到。密封，置于冰箱中冷藏保存。保存时间为3个月。1)内标物？-四氢大麻酸-d对照品溶液：市售100g/mL甲醇溶液，置冰箱中冷冻保存。保存时间为12个月。m)内标物-四氢大麻酸-d对照品工作溶液：将内标对照品溶液用甲醇稀释，配制成10g/mL的工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。保存时间为3个月。n)具塞玻璃试管。o)精密pH试纸。6仪器设备仪器设备包括：)液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源(ESI)。b)涡旋振荡器。c)离心机。d)恒温水浴锅。c)精密移液器：10L100L、100L1000L。D电子天平。7检测步骤7.1定性分析7.1.1样品提取精密量取待测样品尿液1mL,加人1mL的1mol/L氢氧化纳溶液调至pH13,80水浴中水解30min,冷却后加入1mL的1mol/L盐酸溶液调至pH78,再加入100L冰乙酸，调至pH45,加人3L正己烷：乙酸乙酯(9：1)，混旋，高心，吸取上清液，60水浴空气流下吹干，残留物中加入200L乙腈：20mmol/L乙酸铵溶液(9：1)定容，取5L供LC-MS/MS检测。7.1.2添加样品及空白样品取空白尿液样品1mL两份，一份添加”-四氢大麻酸工作溶液制得15ng/mL添加样品，一份做阴性对照，按上述操作与待测样品平行提取和分析。7.1.3仪器检则7.1.3.1液相色谱-串联质谱仪参考条件以下为参考条件，按照本法所获得的液相色谱-串联质谱图参见附录A中的图A.1,可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：MGC18,3m,50mm3mm(内径)或相当者：b)柱温：室温：c)流动相：乙腈：20mmol/L乙酸胺和0.1%甲酸缓冲液(9：1)：d)流速：200ul/min:e)进样量：5L;2GB/T37272-2018D离子源：ESI,负离子模式：g)离子喷雾电压：4000V:h)离子源温度：450；i)检测方式：多反应监测(MRM):)碰撞气、气帘气等气流值应优化至最优灵敏度；k)-四氢大麻酸和内标物的定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量见表1。表1-四氢大麻酸和内标物的定性离子对、定量离子对、去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)名称定性离子对定量离子对DP/VCE/eV343/299-28-四氢大麻酸343/299-80343/245-28”一四氢大麻酸-dg352/308352/308-80-307.1.3.2进样分别吸取待测样品、空白和添加样品提取液，按7.1.3.1条件进样分析。7.1.3.3记录和计算记录各待测样品及添加样品平行进样后”-四氢大麻酸的保留时间及峰面积值。在相同的试验条件下，待测样品中出现两对定性离子对色谱峰，其保留时间与添加样品中”-四氢大麻酸保留时间比较，相对误差在士2.5%内，且相对离子对丰度比与质量浓度相近添加样品中的相对离子对丰度比之相对误差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在”-四氢大麻酸。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许相对误差%相对离子对丰度比502050102010允许的相对误差202530507.2定量分析7.2.1样品提取取待测样品1mL两份，加入10L内标工作溶液，余下同7.1.1。另取空白样品两份，根据待测样品中”-四氢大麻酸的质量浓度情况添加系列质量浓度的-四氢大麻酸，作为添加样品，与待测样品平行操作。待测样品中四氢大麻酸的质量浓度应在工作曲线的线性范围内。7.2.2仪器检测仪器参考条件同7.1.3.1。7.2.3进样分别取待测样品、系列质量浓度的添加样品，按71.3.1条件进样分析。7.2.4记录与计算在系列浓度的”-四氢大麻酸添加样品中，以”-四氢大麻酸与内标物定量离子对的峰面积比(Y)