口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法 GBT 27528-2011.pdf

GB/T27528-20117.3PCR扩增检测7.3.1反应条件设定第一步：4230min,955min。第二步：9510s,551min,7230s,5个循环。第三步：955s,6030s,40个循环，60时设置采集荧光。7.3.2荧光素设定Report Dye设定为FAM,Quench Dye都设定为BHQ,Reference dye设定为None,8结果判定8.1判定前的设置综合分析仪器给出的各项结果，基线以仪器给出的默认值作为参考，國值设定原则以國值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点为准，具体根据仪器噪声情况进行调整，选择FAM通道进行分析。8.2试验成立判定选用FAM通道进行分析，阳性对照样品有对数打扩增曲线，而且C值30，阴性对照没有对数扩增曲线，而且C值为无，二者均成立才可判定试验成立，否则试验无效。8.3阳性判定C,值30的样本为阳性，表明口蹄疫病毒核酸阳性。8.4阴性判定C:值显示为无的样本为阴性样本，表明口蹄疫病毒核酸阴性。8.5可疑判定如果30C1值40，判为可疑。此时重复扩增检测，如果重复打扩增曲线为对数扩增曲线且C40,判为样本阳性，表明口蹄疫变病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。