蝇类抗药性检测方法 家蝇生物测定法 GBT 26350-2010.pdf

中华人民共和国国家标准蝇类抗药性检测方法家蝇生物测定法GB/T26350-2010中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址：服务热线：010-685220062011年4月第一版书号：1550661-42181版权专有侵权必究GB/T26350-20106测试条件温度：251，光周期：14L:10D,相对湿度：60%80%。7敏感基线法7.1原理依据杀虫剂应用剂量和害虫死亡机率值关系建立毒力回归方程，以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线作为为敏感基线。以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比，来确定待测种群的抗性水平。具体是比较两条毒力回归线的b值变化以及由毒力回归线计算得到的半数致死量的变化。7.2操作步骤7.2.1药膜法用丙雨或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂母液稀释到一系列的浓度（通过预实验确定药剂的浓度系列范围，最低浓度时死亡率小于20%，最高浓度时大于80%)，然后取0.5mL溶液加入100mL血清瓶中，不断转动血清瓶，使药液均匀分布于瓶内壁，置于通风橱中过夜，使有机溶剂挥发完全。然后每瓶放试虫20只，用纱网或纱布封口。实验重复5次。以相应溶剂处理为对照组。3h后统计死亡率。根据每一浓度对应的死亡节求出回归方程，根据回归方程可以求出LC5值。需要分别测定并求出实验室敏感种群和待测种样的LC值。7.2.2点滴法用丙酮或其他易挥发的有机溶剂将杀虫药剂母液稀释到一系列的浓度（通过预实脸确定药剂的浓度系列范围，最低浓度时死亡率小于20%，最高浓度时大于80%)，将试虫用乙醚或C0,等麻醉至昏迷。用微量点滴器将0.5L一1L杀虫药剂溶液点滴在雕性家蝇前胸背板上。母个处理点滴30只羽化后3d一5d堆性家蝇，以相应溶剂点滴为空白对照，实险重复3次。将受药后的试虫转人清洁容器内，供给水和食物，正常饲养，24后统计死亡率。根据每一浓度对应的死亡率求出回归方程，根据回归方程可以求出LDs值。需要分别测定并求出实验室敏感种群和待测种群的LDs值。7.3死亡判断试虫完全不动或腹部上翻、抽搐，不能爬行视为死亡。7.4结果表述结果用抗性倍数表述，抗性倍数=待测种群LCo(ID)值/敏感种群LC,(LD)值。7.5判别标准敏感品系和测定样本95%置信限不重叠，且抗性倍数5倍为抗性种群。8诊断剂量法8.1原理依据药剂对敏感品系的毒力回归线，确定一个能够区分敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂量。2