食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法 GBT 18979-2003.pdf

GB/T18979一20032.2.15黄曲毒毒素标准品（黄曲毒毒素B1、B,、G1、G2):纯度99%。2.2.16黄曲霉毒素标准储备溶液：用苯-乙晴(98十2)溶液分别配制0.100mg/mL的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备液，保存于4C备用。2.2.17黄曲霉毒素混合标准工作液：准确移取适量的黄曲霉毒素B,B,、G、G:标准储备液，用苯-乙腈(98十2)溶液稀释成混合标准工作液。2.2.18柱后衍生溶液(0.05%碘溶液)：称取0.1g碘，溶解于20mL甲醇后，加纯水定容至200mL,以0.45m的尼龙滤膜过滤，4C避光保存，2.3仪器和设备实验室常规仪器、设备及下列各项。2.3.1高速均质器：18000r/min22000r/min,2.3.2黄曲霉毒素免疫亲和柱。2.3.3玻璃纤维滤纸：直径11cm,孔径1.5m。2.3.4玻鸦注射器：10mL,20mL。2.3.5玻璃试管：直径12mm,长75mm,无荧光特性。2.3.6高效液相色谐仪：具有360nm激发波长和大于420nm发射波长的荧光检测器。2.3.7空气压力泵。2.3.8微量注射器：100L。2.3.9色谱柱：Cs柱（柱长150mm,内径4.6mm,填料直径5m),2.4分析步骤2.4.1提取2.4.1.1大米、玉米、小麦、花生及其制品：准确称取经过磨细（粒度小于2mm)的试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及甲醇-水(7十3)至125.0mL(V,),以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，准确移取15.0mL(Vz)滤液并加人30.0mL(V)水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1一2次，至滤液澄清，备用。2.4.1.2植物油脂：准确称取试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及加入甲醇-水(7十3)至125.0mL(V),以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，准确移取15.0mL(V2)滤液并加入30.0mL(V3)水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1一2次，至滤液澄清，备用。2.4.1.3酱油：准确称取试样50.0g于250.0mL具塞锥形瓶中，加入2.5g氯化钠及加入甲醇-水(8十2)至100.0mL(V),以均质器高速搅排提取1min。定量滤纸过滤，准确移取10.0mL(Vz)滤液并加入40.0mL(V3)水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤12次，至滤液澄清，备用。2.4.1.4食醋：准确称取5.0g样品，加入1.0g氯化钠，以pH7.0磷酸盐缓冲容液稀释至25.0mL(V1),混匀，定量滤纸过滤。取10.0mL(Vz)滤液加入10.0mL(V)级冲液，混匀，以玻瑞纤维滤纸过滤1一2次，至滤液澄清，备用。2.4.2净化2.4.2.1大米、玉米、小麦、花生及其制品、植物油脂：将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL(V,)样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2mL3mL空气通过柱体。以10mL水淋洗柱子两次，弃去全部流出液，并使2mL3mL空气通过柱体。准确加人1.0mL(V)色谐级甲醇洗脱，流速为1mL/min一2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。2.4.2.2酱油：将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL(V,)酱油样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/i流速级慢通过免疫亲和柱。用10mL0.1%的吐温-20/PBS清洗，再以10mL水清洗柱子两次，弃去全部流出液，并使2mL3mL空气通过柱体。准确加人1.0mL(V)色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min2mL/min,2