食品中合成着色剂的测定 GBT 5009.35-2003.pdf

ICS67.040C53GB中华人民共和国国家标准GB/T5009.35-2003代替GB/T5009.351996食品中合成着色剂的测定Determination of synthetic colour in foods2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会发布GB/T5009.35-2003食品中合成着色剂的测定范围本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。本标准适用于食品中合成着色剂的测定。本方法检出限：新红5ng、柠檬黄4ng、苋菜红6ng、胭脂红8ng、日落黄7ng、赤藓红18ng、亮蓝26 ng,当进样量相当0.025 g时，检出浓度分别为0.2 mg/kg;0.16 mg/kg:0.24 mg/kg;0.32mg/kg;0.28 mg/kg;0.72 mg/kg:1.04 mg/kg.第一法高效液相色谱法2原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。3试剂3.1正已烷。3.2盐酸。3.3乙酸。3.4甲醇：经0.5m滤膜过滤。3.5聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛。3.6乙酸铵溶液(0.02 mol/L):称取 1.54 g乙酸铵，加水至1 000 mL,溶解，经 0.45 gm滤膜过滤。3.7氨水：量取氨水2mL,加水至100mL,混匀。3.8氨水-乙酸铵溶液(0.02 mol/L):量取氨水 0.5 mL,加乙酸铵溶液(0.02 mol/L)至1000 mL,混匀。3.9甲醇-甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL甲酸40mL,混匀。3.10柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸(CHOH2O),加水至100mL,溶解混匀。3.11无水乙醇-氨水-水(7+2+1)溶液：量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL,混匀。3.12三正辛胺正丁醇溶液(5%)：量取三正辛胺5mL,加正丁醇至100mL,混匀。3.13饱和硫酸钠溶液。3.14硫酸钠溶液(2g/L)。3.15pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH值到6。3.16合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100g,置100 mL容量瓶中，加pH6水到刻度，配成水溶液(1.00mg/mL)。3.17合成着色剂标准使用液：临用时上述溶液（或将3.16）加水稀释20倍，经0.45gm滤膜过滤，配成每毫升相当于50.0g的合成着色剂。4仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器，254nm波长。GB/T 5009.35-20035分析步骤5.1试样处理5.1.1桔子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.0g40.0g,放入100mL烧杯中，含二氧化碳试样加热驱除二氧化碳。5.1.2配制酒类：称取20.0g40.0g,放100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。5.1.3硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取5.00g10.00g粉碎试样，放入100mL小烧杯中，加水30mL,温热溶解，若试样溶液pH值较高，用柠檬酸溶液调pH值到6左右。5.1.4巧克力豆及着色糖衣制品：称取5.00g10.00g,放入100mL小烧杯中，用水反复洗涤色素，到试样无色素为止，合并色素漂洗液为试样溶液。5.2色素提取5.2.1聚酰胺吸附法：试样溶液加柠檬酸溶液调pH值到6，加热至60，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒人试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60CpH=4的水洗涤3次5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次5次（含赤藓红的试样用5.2.2法处理），再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次5次，每次5mL,收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经0.45gm滤膜过滤，取10L进高效液相色谱仪。5.2.2液-液分配法（适用于含赤藓红的试样）：将制备好的试样溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺正丁醇溶液(5%)10mL20mL,振摇提取，分取有机相，重复提取至有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL,分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL,转移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混匀，加氨水提取2次3次，每次5mL,合并氨水溶液层（含水溶性酸性色素)，用正已烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL。经滤膜0.45m过滤，取10L进高效液相色谱仪。5.3高效液相色谱参考条件5.3.1:YWG-Cis 10 m不锈钢柱 4.6 mm(i.d)250 mm。5.3.2流动相：甲醇：乙酸铵溶液(pH=4.0.02mol/L)。5.3.3梯度洗脱：甲醇：20%35%，3%/min;35%98%,9%/min;98%继续6 min。5.3.4流：1 mL/min。5.3.5紫外检测器，254nm波长。5.4测定取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注人高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。5.5结果计算试样中着色剂的含量按式(1)进行计算。A1000X-mV:/V110001000(1)式中：X试样中着色剂的含量，单位为克每千克(g/kg);A样液中着色剂的质量，单位为微克（g);V2进样体积，单位为毫升(mL);V1试样稀释总体积，单位为毫升(mL);m试样质量，单位为克(g)。计算结果保留两位有效数字。2