食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定 GBT 22255-2008.pdf

ICS 67.040C53GB中华人民共和国国家标准GB/T22255-2008食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定Determination of sucralose in foods2008-07-31发布2008-11-01实施中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会发布GB/T22255-2008食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定1范围本标准规定了食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定方法。本标准适用于食品中三氯难糖的测定。本标准检出限：当取样量5.00g、定容至5.00mL、进样量20L时，检出限为0.004g/kg:定量限为0.014g/kg。本标准的线性范围：0.100mg/mL0.800mg/mL。2原理三氯蔗糖是水溶性物质，易溶于水和甲醇。试样经75%甲醇水溶液处理使蛋白分离，用正己烷萃取除去脂防，水相经水浴蒸干，加去离子水定容，高效液相色谱Cs反相色普柱分离后，由蒸发光散射检测器检测，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。3试剂和材料3.1甲醇(CH,OH,AR级)，3.2乙睛(CH,CN,HPLC级).3.3正己烷(CH,AR级)。3.4蒸榴水(0.5mS/m)。3.5中性氧化铝固相萃取柱(2g装)。3.6三氯蔗糖标准品：纯度99.0%。3.7三氯蔗糖储备液(1.00mg/mL):称取三氯蔗糖标准品0.1g(精确至0.0001g),用水溶解并定容至100mL,混匀（置于4冰箱保存5d)。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪：附蒸发光散射检测器。4.2漩涡振荡器。4.3离心机：大于3000r/min。4.4超声仪，5分析步骤5.1试样的制备5.1.1低脂，无脂及非酱色类试样的制备5.1.1.1准确称取均匀试样1g5g(精确至0.001g),置于50mL的离心管中，加入5mL蒸馏水，漩涡振荡器上振荡3min后加入15mL甲醇，继续振荡30s,超声波提取20min后，以3000r/min离心5min,仔细将上清液移人50mL玻璃蒸发皿内。5.1.1.2沉淀物加入10mL75%甲醇水溶液，玻棒搅拌均匀后，以3000r/min离心5min,上清液合并于蒸发皿中，置于水浴锅上，在沸水浴上蒸干，残渣用水溶解并定容至5.00mL后过0.45m滤膜，滤液备用。5.1.2含脂肪试样的制备按5.1.1.1操作，上清液移入分液漏斗中，残渣按5.1.1.2操作，上清液合并于分液漏斗内，然后取GB/T22255-200830mL,正已烷加入分液浦斗中，振摇2in,静置20min后分层，移出下层液置于蒸发皿内，于沸水浴上蒸干，残渣用水溶解并定容至5.00mL后过0.45m滤膜，滤液备用。5.1.3酱色类试样的制备甜味酱、豆瓣酱、酱油类试样经5.1.1，或5.1.2处理后所得的5.00mL水溶液通过中性氧化铝固相萃取柱，弃去最初2mL滤液，接收余下滤液，再过0.45m滤膜，滤液备用。5.2液相色谱参考条件5.2.1色谱柱：C1s(4.6mm150mm,5um).5.2.2流速：1.0mL/min.5.2.3柱温：35。5.2.4进样量：5.0L20.0L。5.2.5流动相梯度洗脱条件：见表1。表1流动相梯度洗脱条件时间/min超纯水（体积分数）/%乙睛（体积分数）%089111389111410902110902289112589115.2.6蒸发光散射检测器。5.3色谱分析取制备的试样滤液5.0L20.0L(视试样中三氯蔗糖含量多少而定)进样，进行HPLC分析。以保留时间定性，以试样峰面积与标准比较定量。5.4标准曲线制备准确移取标准储各液(3.7)配制成标准使用液，浓度为0.100mg/mL、0.300mg/mL、0.500mg/mL、0.,800mg/mL,进样10L,在上述色谱条件下进行HPLC测定，然后按质量(g)与峰面积之间的关系绘制标准曲线，曲线方程见式(1)：y=hx“4444(1）式中：y一峰面积；b、a一与蒸发室温度及流动相性质等试验条件有关的常数：x一三氯蔗糖的质量，单位为微克(g)。6结果计算试样中三氯蔗糖的含量按式(2)进行计算：X=mX VmX V式中：X一试样中三氯蔗糖的含量，单位为克每千克(g/kg);一进柱样液中三氯蔗糖的质量，单位为微克(g):V。一试样制备液体积，单位为毫升(mL):一试样称取质量，单位为克(g)；GB/T22255-2008V进柱样液的体积，单位为微升(pL)。计算结果保留三位有效数字。7精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8色谱图在上述色谱条件下，色谱图见图1图2。三氯蔗糖三氯蔗糖=图1标准色谱图图2试样色谱图