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2023年生防木霉拮抗黄瓜枯萎病菌的初步研究.docx
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2023 年生防木霉 拮抗 黄瓜 枯萎 病菌 初步 研究
生防木霉拮抗黄瓜枯萎病菌的初步研究 木霉是一种重要的生防菌,对黄瓜枯萎病菌有很强的拮抗作用,主要作用方式有:竞争、重寄生、抗生、溶菌作用。温室盆栽试验显示,木霉可显著防治黄瓜枯萎病菌。 关键词木霉;黄瓜枯萎病菌;生防 木霉(trichodermaspp.)属真菌界、双核菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科、真菌属,是迄今为止研究和应用最多的一类生防菌[1]。木霉的生防机制复杂,主要包括竞争、重寄生、抗生、溶菌等[2]。研究木霉对病原菌的作用机制及防治效果,可以优选木霉菌株,从而提高生防效率。 1材料与方法 1.1试验材料 以病株上别离的黄瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)为拮抗对象,土壤中别离的木霉菌株为拮抗菌。 1.2试验方法 1.2.1竞争作用。采用对峙培养法[3],在直径为9cm的pda平板一侧接种直径为5mm的病原真菌菌丝块,在平板另一侧接种拮抗菌,28℃共培养,观察两菌的生长情况。 1.2.2重寄生作用。在pda培养基中央放置1块20mm×20mm无菌盖玻片,在左侧距盖玻片40mm处接种木霉,右侧距盖玻片20mm处接种黄瓜枯萎病菌,28℃恒温培养。取下盖玻片,于显微镜下观察菌丝体的作用方式。 1.2.3抗生作用。在装有20230mlpdb的三角瓶中接入直径5mm的木霉菌块,28℃、150rpm培养6d,取滤液离心后过0.22μm细菌滤器。在90ml、45℃的pda中参加2023ml上述滤液,摇匀倒成平板,接种直径为5mm的黄瓜枯萎病菌菌块。28℃恒温培养,观察生长情况。 1.2.4溶菌作用。将培养4d的木霉发酵液8000rpm离心2023min。取15ml上清液倒入培养皿中,接入黄瓜枯萎病菌菌块。浅层培养5d后观察生长情况。以高温灭菌的木霉上清液中培养的病菌菌块为对照。 1.2.5盆栽试验。将黄瓜种子经70%乙醇消毒1min,2%naclo消毒5min,55℃温水浸15~20min,25℃浸泡2~3h,无菌水冲洗3次,25~30℃下催芽1~2d。将黄瓜枯萎病菌接种到麸皮∶玉米粉为3∶1的培养基中,28℃恒温箱中培养至长满整个三角瓶。将催芽根本一致的黄瓜苗在木霉菌悬液(约1×12023cfu/ml)中浸1h,取出于灭菌滤纸片上枯燥1h后,播种于拌有黄瓜枯萎病菌制剂的土壤中。以无菌水浸种处理为对照。2结果与分析 2.1竞争作用 平皿对峙试验显示,木霉生长迅速,可快速占据空间,有很强的生长竞争优势,能有效抑制黄瓜枯萎病菌的生长。 2.2重寄生作用 显微镜下观察到木霉菌丝体缠绕着黄瓜枯萎菌丝生长,并在病菌菌丝上产生大量分枝,产生寄生作用。 2.3抗生作用 在pda培养基中参加2023%的木霉发酵液后,黄瓜枯萎病菌菌丝生长不旺盛,与对照有显著的差异。 2.4溶菌作用 在未灭菌的木霉上清液中培养的黄瓜枯萎菌块,仅有细小菌丝的生长,数量较少;而在灭菌后的上清液中,黄瓜枯萎菌生长旺盛,形成大块菌丝团。 2.5盆栽防效试验 盆栽试验结果说明,与对照相比,木霉浸种处理的黄瓜幼苗死亡率为25.0%,显著低于对照的66.7%。 3结论与讨论 作为平安而环境友好的生防因子,木霉在田间的施用可有效地防治作物病害,从而防止大量使用农药导致病原菌抗药性的产生、作物农药含量超标及环境污染等问题[4-6]。因此,对木霉生防机制深入而全面的研究,将对绿色农业的可持续开展产生重要的推动作用。 4参考文献 [1]辛雅芬,商金杰,高克详.拮抗木霉菌的生防机制研究进展[j].东北林业大学学报,2023,33(4):88-91. [2]harmang,howellcr,viterboa,etal.trichodermaspecies-opportunistic,avirulentplantsymbionts[j].nature,2022(2):43-56. [3]蒲金基,曾会才.绿色木霉ltr12-1对黄瓜枯萎病菌防治作用机制的初步研究[j].热带农业科学,2022,22(4):22-25. [4]吕天晓,徐凤花,李世贵,等.生防木霉菌原生质体的制备及再生研究[j].生物技术通报,202223(4):130-134. [5]庄敬华,陈捷,杨长成,等.生防木霉菌生物平安性评价[j].中国农业科学,2023,39(4):715-720. [6]王勇,王万立,刘春艳,等.生防木霉菌tr9701的鉴定及其生物学特性[j].华北农学报,2023,21(1):20230-20234. 第4页 共4页

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