谷氨酰胺转胺酶活性检测方法 GBT 34795-2017.pdf

GB/T34795-20176.1 Tris-HCl缓冲液(pH6.0,0.2m0l/L)称取12.114g三羟甲基氨基甲烷(Tis),溶解在450mL水中，使用1mol/L盐酸调节pH至6.00士0.05，转入500mL容量瓶中，定容并摇匀。6.2试剂A称取1.000gN-苄氧羰基-L-谷氨酰甘氨酸，0.695g羟胺盐酸盐(Hydroxylamine hydrochloride),0.307g还原型谷胱甘肽(GSH),溶解于Tris-HC1缓冲液(pH6.0,0.2mol/L),使用1mol/L氢氧化钠调节pH至6.000.05，用Tris-HC1缓冲液(pH6.0,0.2mol/L)定容至100mL。6.33mol/L盐酸溶液将36%38%盐酸与水按体积比1：3稀释。6.412%三氯乙酸(TCA)溶液称取12.00g三氯乙酸溶于80mL水中，定容至100mL。6.55%三氯化铁(FcC,)溶液称取5.00g三氯化铁溶于0.1mol/LHC1中，定容至100mL。6.6试剂B由6.3,6.4、6.5所述溶液按体积比1：1：1混合，现配现用。6.7I-谷氨酸-Y-单异羟肟酸标准储备液称取0.1621g的L-谷氨酸-y-单异羟肟酸(L-Glutamie acid y-monohydroxamate),用10mL的Tis-HC缓冲液(pH6.0,0.2mol/L)溶解后，转移至100mL的容量瓶中，用Tris-HCI缓冲液(pH6.0,0.2mol/L)定容并摇匀。7分析步骤7.1标准曲线的绘制分别移取L-谷氨酸-y-单异羟厉酸标准储备液0mL、0,2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL和4.0mL到10mL的容量瓶中，再用Tris-HC缓冲液定容至刻度，摇匀，L-谷氨酸-y-单异羟肟酸的浓度分别是0mol/mL、0.2mol/mL、0.5mol/mL、1.0mol/mL、2.0mol/mL和4.0mol/mL。取1mL试剂A与0.4mL不同浓度的L,-谷氨酸-y-单异羟肟酸标淮溶液混合，37.0士0.5水浴10min,加0.4mL试剂B终止反应。使用1cm的石英比色皿，以L-谷氨酸-Y单异羟肟酸浓度为0mol/mL的标准溶液反应液作空白，在525m处测定每个稀释液的吸光度。以L-谷氨酸-Y单异羟肟酸浓度为横坐标，以稀释液的吸光度为纵坐标做标准曲线，以最小二乘法得出线性回归方程。相关系数应在0.9990以上时方可使用，否则需重做。7.2试验液的制备称取样品0.1g,精确至0.0001g,用Tis-HC1缓冲液(pH6.0,0.2mol/L)溶解后，转移至合适容量瓶中并定容，使得最后的溶液中含有0.17U/mL0,23U/mL的酶活力。2