河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中九种糖皮质激素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GBT 22957-2008.pdf

GB/T22957-2008前言本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本标准主要起草人：刘永明、李金、吴艳萍、冯冠、曹彦忠、庞国芳。GB/T22957-20081.0mg/mL储备溶液。配成的标准储备液应在温度低于一20冰箱中保存。4.125.0g/mL标准工作溶液：分别准确吸取适量的糖皮质激素标准储备溶液，用甲醇分别配制成5.0g/mL标准工作溶液。配成的标准工作溶液应在温度低于4C冰箱中保存。4.13混合标准工作溶液I:分别吸取适量的氢化可的松和可的松标准工作溶液，用甲醇配成浓度为0.05g/mL的混合标准工作溶液。此溶液应在温度低于4C冰箱中保存。测定样品使用时，用20%乙腈溶液将混合标准工作溶液I配成不同浓度的的混合标准工作溶液。4.14混合标准工作溶液：分别吸取适量的泼尼松龙、没尼松、甲基泼尼松龙、倍他米松，地塞米松，倍氯米松、醋酸氟氢可的松标准工作溶液，用甲醇配成泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松为0.05g/mL,倍氯米松、醋酸氟氢可的松为0.25g/mL的混合标准工作溶液。此溶液应在温度低于4冰箱中保存，4.15基质混合标准工作溶液：用空白样品提取液将混合标准工作溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液。此溶液应现用现配。4.16 Cleanert Silica固相萃取柱”或相当者：500mg,6mL。使用前用6mL正己烷预处理，保持柱体湿润。4.17滤膜：0.2m。5仪器5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3固相萃取真空装置，5.4真空泵：真空度应达到80kPa。5.5均质器。5.6振荡器。5.7高速冷冻离心机：转速13000r/min。5.8旋转蒸发器。5.9氮气浓缩仪。5.10具塞塑料离心管：50mL。5.11样品管：10mL。5.12梨形瓶：150mL。6试样的制备与保存6.1试样的制备从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，注明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2试样保存将试样于一18C冷冻保存。7测定步骤7.1提取称取5g试样（精确到0.01g),置于50mL具塞塑料离心管中，加入10g无水硫酸钠，加25mL乙1)Cleanert Silica固相萃取柱是Agda公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。GB/T22957-2008酸乙酯，用均质器均质1min,在振荡器中振荡20min,以10000r/min离心10min,取上清液至梨形瓶中。再用25L乙酸乙酯提取一次，合并上清液，用旋转蒸发器于45C水浴上减压蒸发至近干，用1mL乙酸乙酯和5mL正己烷溶解。7.2净化将提取液移至经预处理的Cleanert Silica固相萃取柱中，用6mL正己烷洗涤梨形瓶和萃取柱，弃去全部流出液。减压抽干1min,用6mL丙酮十正己烷(2十3)洗脱，收集洗脱液于10mL样品管中，用氨气浓缩仪吹干，用1mL20%乙腈溶液溶解残渣，以4000r/min离心5min,上清液过0.2m滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.3测定条件7.3.1液相色谱参考条件a)色谱柱：Atlantis Cus,3um,150mmX2.1mm(内径)或相当者：b)柱温：30C:c)进样量：20Ld)流动相、流速和梯度洗脱条件见表1。表1流动相、流速和梯度洗脱条件时间/min流速/(L/min)乙睛/%0.1%甲酸溶液/%0.00200208010.00200703013.00200901013.01200208020.0020020807.3.2质谱参考条件)离子源：电喷雾离子源(ESI):b)扫描方式：负离子扫描：c)检测方式：多反应监测：d)气帘气压力：0.138MPa:e)雾化气压力：0.276MPa:D辅助加热气压力：0.138MPa:g)离子源温度：500：)定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量见表2。表2糖皮质激素的定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量化合物中文名称化合物英文名称定性离子对(m/)定量离子对(m/x)去熊电压V碰撞能量V405/329-30-25泼尼松龙prednisolone405/329405/359-30-15403/327-19-21泼尼松prednisone403/327403/357-19-15407/331-28-25氢化可的松hydrocortisone407/331407/361-28-15405/329-22-24可的松cortisone405/329405/359-22-15