工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定 MPN法 GBT 14643.5-1993.pdf

GB/T14643.5-936.4刻度吸管的灭菌6.4.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约1015mm,棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6.4.2每支刻度吸管用1条约4050mm宽的牛皮纸条，以45左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，粗端用多余纸条折叠打结，不使散开。标上度量，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于160士2灭菌2h。6.5试管的灭菌将洗净并烘干后的试管塞上密封的塞子，数支一捆，每捆管口用牛皮纸包扎，置电热干燥箱中，于160士2灭菌2h.6.6采样瓶的灭菌将洗净并烘千后的1000mL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好，扎紧，置电热干燥箱中，于160士2灭菌2h.6.7硫代硫酸钠灭菌将硫代硫酸钠放在无菌箱（室）内，并均匀地摊在离紫外线灯30cm处灭菌30min。7测定步骤7.1水样的采集7.1.1用无菌采样瓶采集被测样品，在取样过程中，要保护瓶口和颈部，防止这些部分受杂菌污染，瓶内要灌满水样。7.1.2若采集的水中有余氯，应在采样前，在无菌操作下，于无菌采样瓶(6.6)中加入硫代硫酸钠(6.7),加入量为每升水样约0.1g。7.1.3水样采集后，应立即进行测定，如果在2h内不能进行测定，应把水样放在冰箱中，于410保存，存放时间不宜超过24h。经冷冻保存后的水样需测定时，从冰箱中取出，于30左右活化45h,再进行测定。7.2无菌箱（室）灭菌把试验所用的无菌培养基、无菌稀释水、无菌吸管等用品放入无菌箱（室）内，打开紫外线灯灭菌30min7.3水样的稀释和接种7.3.1水样放入灭过菌的无菌箱（室）(7.2)中，立即用75%(VV)乙醇溶液浸泡的医用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱（室）内的酒精灯。7.3.27.3.7条操作应在无菌箱（室）内火焰区进行。7.3.2选择适宜的稀释度，应使最后一个稀释度接种培养后无硫酸盐还原菌生长，在空白稀释水样瓶(6.3)上标上稀释度数。7.3.3用10倍稀释法稀释水样，即用5mL无菌吸管(6.4)吸取5mL水样注入到45mL空白稀释水中充分摇匀，此时稀释度为101。7.3.4另取一支5mL无菌吸管吸取5mL稀释度为10-1水样注入到第二个稀释水中，充分摇匀，此时稀释度为102，依次类推，直至需要的稀释度为止。7.3.5将水样（包括稀释水样）分别接种于无菌试管(6.5)中，试管置试管架上，每个稀释度重复接种5管（根据需要也可重复接种3管或4管）每管接种1mL,每接一个稀释度更换一支无菌吸管。7.3.6另取一组试管不接水样作为空白。7.3.7用事先在水浴上加热至60，并迅速冷却到20的无菌培养基(6.2.4)灌满试管(7.3.5)(7.3.6)盖上密封盖子。7.4培养3