化学品 蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验 GBT 41691-2022.pdf

GB/T41691-2022引言本文件描述了在实验室条件下进行的蜜蜂幼虫急性毒性试验方法，以经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.237蜜蜂幼虫毒性试验，单次暴露，为依据。No.237的方法以一种法国开发的比较成熟的方法为基础，从2005年到2008年已在欧洲7个实验室进行了环比试验。本方法涉及美国、加拿大和欧洲各国的试验要求，在第1层级测试策咯的实验室条件下，投喂加标饲料来测试化学品对蜜蜂幼虫的毒性。本方法的目的是通过蜜蜂幼虫对某一化学品（特别是农药的有效成分或制剂）进行单次暴露，测得72h半致死剂量(72LD0)。所得数据用于蜜蜂种群风险评估。本方法是对“蜜蜂急性经口毒性试验”(GB/T21812)和“蜜蜂急性接触性毒性试验”(GB/T21813)成蜂试验方法的补充。在整个蜜蜂的风险评估流程中，本方法属于较低层级的试验方法。GB/T41691-2022蒸气压和亭利常数：d)受试物结构式；)受试物纯度；fD按照OECD化学品测试导则No.112方法测定的解离常数pK,值：g)按照GB/T21855方法测定的水解作用：h)光解；D按照GB/T21852或GB/T21853方法测定的正辛醇-水分配系数，)受试物的物理性质及来源（批次、批号）。5试验原理在试验第一天(D1),从三个繁殖蜂巢中取出第一龄期(L1)蜜蜂幼虫（即同为一日龄的幼虫），分别放入48孔细胞培养板，在板孔中人工标准化饲养。在试验第四天(D4),将受试物按5个递增浓度与饲料混合，按单次剂量投喂蜜蜂幼虫。记录试验第五天(D5)、第六天(D6)和第七天(D7)的死亡量。计算幼虫72h的LDso(D7的累积死亡量)。6参比物质首选乐果原药(CAS号60-51-5)为参比物质，用来验证试验系统和试验条件的可靠性。按含有活性物质（有效成分）的剂量(8.8g士0.5g)/幼虫，将参比物质溶解于最多3L水中，在处理幼虫前，与常规饲料混合，在试验第四天(D4)投限给蜜蜂幼虫，7试验准备7.1试验装置及准备幼虫应在透明的聚苯乙烯育王台基中问养，其内径为9mm,深度为8mm。育王台基在试验开始时进行杀菌，如可用酒精或其他杀菌溶液浸泡30mi,取出后在通风橱中晾干。将育王台基每个格放置于48孔细胞培养板的一个小孔中。宜将一片牙科棉吸入加有150gL甘油的杀茵液500L,放入孔的底部，使育王台基的顶部与培养板保持水平（见图1）。标引序号说明：1一幼虫十何料：2一有王台基3一培养孔：4一浸透杀菌液的牙科棉图1培养孔中的幼虫单元格2