2022年医学专题—HLA和ABO血型配型(1).ppt

,第二十八章 移植(yzh)免疫及其免疫检测,第一页，共五十八页。,移植（transplantation）:将健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能(gngnng)的现代医疗手段。移植物（graft）供 体（donor）受 体（recipient）或宿主（host）,概 述,第二页，共五十八页。,自体移植根据移植物来源 同系移植 同种异体移植 异种(y zhn)移植 原位移植根据移植部位 异位移植 器官移植移植物种类 支架组织移植 细胞移植,移植(yzh)的类型,第三页，共五十八页。,组织(zzh)器官移植种类和命名,移植名称 供者、受者关系 举例 自体移植 同一个体 自体断肢再植，自体皮片移植 同系或同基因移植 同系或同基因 人的单卵双生子间的器官移植 的个体间 同品系小鼠的皮片移植 同种异基因移植 同种不同(b tn)基因 人与人之间的肾移植 的个体间 不同品系小鼠间的皮片移植 异种移植 异种动物间 狗的器官移植给猩猩 猪的器官移植给狗,第四页，共五十八页。,第一节 引起排斥(pich)反应的靶抗原,第五页，共五十八页。,1 主要(zhyo)组织相容性抗原人 HLA 鼠 H-2遗传特征：单倍型遗传高度多态性2 次要组织相容性抗原,主要组织(zzh)相容性抗原（MHC分子）,第六页，共五十八页。,父 母 HLA是人体多态性最丰富(fngf)的基因系统。据1999年的统计，HLA复合物等位基因总数已达到1031个，其中HLA-B等位基因有301个,A9Cw3B7,A2Cw2B13,A1Cw1B5,A3Cw4B8,HLA的遗传(ychun)特征,第七页，共五十八页。,第二节 排斥(pich)反应的种类及发生机制,第八页，共五十八页。,移植(yzh)排斥反应（transplantation rejection）,针对移植抗原产生免疫应答，从而导致移植物功能丧失(sngsh)或受者机体损害的过程。,分类(fn li)：超急性排斥反应 急性排斥反应 慢性排斥反应,第九页，共五十八页。,机制：受者体内存有抗供者移植物的预存抗体，与抗原结合，激活补体和凝血系统,导致血管内凝血。预存抗体来源：1、供受者之间ABO 血型不合；2、受者反复多次输血、妊娠或既往作过移植。处理：重新移植预防(yfng)：ABO血型配型、细胞毒实验,1.超急性(jxng)排斥反应,第十页，共五十八页。,2.急性排斥(pich)反应,体液性排斥 抗体激活补体，并有CD4+T 细胞参与，导致(dozh)急性血管炎细胞性排斥 CD8+CTL细胞的细胞毒作用、CD4+T和巨噬细胞的作用，导致急性间质炎。处理 使用免疫抑制剂,第十一页，共五十八页。,在急性排斥反应中的两条抗原提呈途径：直接途径（direct path）:残留于供者移植物内的抗原提呈细胞（过客细胞）对受者机体的免疫系统提供最初的抗原刺激。这种抗原性刺激，来自移植物中树突状细胞和单核细胞等表面富含的HLA-、-类分子 间接途径（indirect path）:通过受者体内(t ni)的抗原提呈细胞对具有同种异基因HLA-、-类分子的移植物实质细胞的识别。无论是供者还是受者，其抗原提呈细胞提供的IL-1、IL-6等刺激信号，有助于触发淋巴细胞的活化,第十二页，共五十八页。,同种移植排斥反应的发生(fshng)机制,第十三页，共五十八页。,慢性排斥反应的介导因素：T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。B细胞产生的抗体活化补体或通过ADCC破坏血管内皮细胞。急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变，此与细胞 和体液免疫均有关系。非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。受者患有高血压或糖尿病也可促使慢性排斥反应的发生(fshng)临床特征：对免疫抑制疗法不敏感无特异性治疗方法，最终需要重新进行器官移植,3.慢性(mn xng)排斥反应,第十四页，共五十八页。,定义：在骨髓(su)移植时，供者骨髓(su)中的免疫细胞启动以受者细胞为靶抗原的免疫应答反应，引起攻击受者的移植物抗宿主反应。GVHD也可见于脾、胸腺和小肠移植。发生机制：T细胞起主要作用 IL-2、IL-6、TNF-、IFN-等 ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等,4.移植物抗宿主(szh)反应,第十五页，共五十八页。,第三(d sn)节 HLA分型方法,第十六页，共五十八页。,血清学分型法,应用一系列已知抗HLA的特异性标准分型血清(xuqng)与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。,操作简便易行、节约(jiyu)试剂、结果可靠、重复性好 无需特殊设备,优点(yudin),缺点,耗时长不同批号抗血清结果常有不同,第十七页，共五十八页。,用于HLA分型的微量细胞毒试验(shyn),第十八页，共五十八页。,血清学分型法,第十九页，共五十八页。,第二十页，共五十八页。,细胞学分型法,以混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture,MLC）或称混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）为基本(jbn)技术的HLA分型法。能用本法测定的抗原称为LD抗原（lymphocyte defined antigen）,包括HLA-D、-DP。,1.单向(dn xin)MLC,原理：将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用3H-TdR掺入法测定细胞增殖强度，从而(cng r)判断受检细胞的HLA型别。,根据选用的刺激细胞类型分为：,1阴性分型法,2阳性分型法,第二十一页，共五十八页。,遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向MLC。在此试验中，各自(gz)的淋巴细胞既是刺激细胞，又是反应细胞，反应后形态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过形态法计数转化细胞。,2.双向MLC,第二十二页，共五十八页。,分子生物学分型法,限制性片断长度多态性（restriction fragment length polymorphism,RFLP）分析：最早建立的研究(ynji)HLA多态性的DNA分型技术 PCR-RFLP分型法：对DNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加,1.RFLP与PCR-RFLP分型法,第二十三页，共五十八页。,序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequence specific oligonucleotide,PCR-SSO）是以PCR为基础(jch)，将凝胶上扩增的HLA基因DNA转移至硝酸纤维膜或尼龙膜，进而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之进行杂交，从而对扩增产物作出HLA型别判断。分类：斑点或印渍法：用扩增的待测DNA印渍或点至固相支持物，再与探针行杂交，利于大量标本分型反向斑点或印渍法：将已知DNA印渍或点至固相支持物，然后与扩增的待测DNA（预先标记）杂交，用于少量标本分型 PCR-SSO是类HLA分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的HLA-DR、DQ、DP等位基因,2.PCR-SSO分型法,第二十四页，共五十八页。,基因芯片(gene chip)是近年(jn nin)发展起来的一项新技术,将其与PCR-SSO结合应用于HLA分型，可使分型趋于规模化和自动化，尤其在HLA多态性和疾病遗传背景分析等方面更具优势。HLA的基因芯片分型法，实际上是PCR-SSO反向斑点或印渍法的微型化。目前，基因芯片在HLA分型领域的应用尚属起步阶段。,2.PCR-SSO分型法,第二十五页，共五十八页。,原理：应用设计的一套HLA等位基因的序列特异性引物（sequence specific primer,SSP）,对待(dudi)测DNA进行PCR扩增，从而获得HLA型别特异性的扩增产物HLA基因扩增的特异性包括：座位特异性（locus-specific），如HLA-A、B、-DRB1等；组特异性（group-specific），如DRB1-01、DRB1-02等；等位基因特异性（allele-specific），如DRB1*0401、DRB1*0402等。,3.PCR-SSP分型法,第二十六页，共五十八页。,单链构象特异性聚合酶链反应（PCR-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP）是以对待测基因PCR扩增为基础，对扩增的单链DNA（ssDNA）的HLA分型方法。原理：对ssDNA进行无变性剂的聚丙烯酰凝胶电泳时，因其序列(xli)的差异可形成不同的空间构象而导致电泳迁移率的差异，如此可分辨出单一碱基的差异和检测出DNA多态性或点突变，有助于新的HLA等位基因或突变体的发现。特点：PCR-SSCP作为PCR-SSO的补充，在区分纯合子和杂合子基因方面有其独到之处，有利于排除SSO杂交的假性。,4.PCR-SSCP分型法,第二十七页，共五十八页。,基于序列的HLA分型法（sequence-based HLA typing,SBT），通过对扩增后的HLA基因片段通过核酸序列测定来判断HLA型别。基本过程：分离待测细胞的DNA，应用座位(zu wi)、组或等位基因特异性引物进行PCR扩增，扩增产物的纯化和测序，测出的基因序列与HLA基因库的DNA已知序列比较，判断待测的HLA型别。,5.SBT分型法,第二十八页，共五十八页。,第四节 常见(chn jin)的组织或器官移植,第二十九页，共五十八页。,肾脏(shnzng)移植,肾脏移植，创始(chungsh)于1950年，是临床开展最早、应用最多和效果最佳的一种器官移植。,1.组织配型在肾脏(shnzng)移植中的应用,组织配型是肾脏移植前选择供者的重要手段 ABO血型配型、HLA配型和 交叉配型肾源选择的原则 以ABO血型完全相同者为好，至少能够相容 选择最佳HLA配型的供者器官,第三十页，共五十八页。,2.肾移植受者的疗效(lioxio)检测,疗效监测：受者免疫状态检测临床观测项目:T细胞总数、CD4/CD8比值和IL-2及其受体的检测，判断排斥反 应的发生和评估免疫抑制剂治疗效果 肾组织(zzh)活检，预测排斥反应的发生 CsA血药浓度检测，指导合理用药，减少肾毒性,第三十一页，共五十八页。,肝脏(gnzng)移植,特点：HLA是否匹配与肝脏移植效果无显著(xinzh)差异机制：肝脏移植时，因HLA不配仅发生较弱的排斥反应，而免疫抑制剂 的应用有效控制了排斥反应的发生肝脏移植时仍应尽可能进行HLA配型,1.组织配型在肝脏(gnzng)移植中的应用,第三十二页，共五十八页。,组织病理学特点：肝移植术后第2天，汇管区出现明显的白细胞浸润，汇管区和肝窦的白细胞浸润第7天达高峰，涉及到T细胞、B细胞、巨噬细胞、嗜酸性和中性粒细胞。在浸润的T细胞中CD8+细胞高于CD4+细胞，也见有IL-2R和CD25+的活化T细胞。排斥反应发生几率：约2/3的肝移植患者(hunzh)出现过排斥反应的病理学改变，也有8的病例术后发生急、慢性排斥反应，占肝移植致死原因的10%。,2.肝移植受者的疗效(lioxio)检测,第三十三页，共五十八页。,心脏移植与心肺(xn fi)联合移植,ABO血型匹配：避免急性排斥反应的首要条件HLA I、类分子(fnz)匹配：移植器官长期存活的重要因素。淋巴细胞毒交叉配合和群体反应性抗体检测,1.组织(zzh)配型在心脏和心肺联合移植中的应用,第三十四页，共五十八页。,免疫监测指标：外周血淋巴细胞总数(zngsh)T、B细胞的转化能力 T细胞亚类百分数及比值 CTL细胞毒作用 细胞因子及其受体表达或转录水平 转化生长因子 NK细胞数及其介导的自然杀伤或ADCC效应