蜂胶中芦丁、杨梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松属素、苛因、高良姜素含量的测定方法 液相色谱-串联质谱 检测法和液相色谱-紫外检测法 GBT 19427-2003.pdf

GB/T19427-20035.3温度可调超声波水浴。5.4注射过滤器：容积为3mL或5mL,并带有0.45m过滤膜。5.5微量注射器：25L.6分析步骤6.1试样溶液的制备称取0.1g0.2g试样，精确到0.001g,置于50mL容量瓶内，加入40mL甲醇，在60C的超声波水浴中，振荡40mi,待样品完全溶解后，取出冷却至室温。然后用甲醇定容至50mL100mL,摇匀。用注射过滤器将试样溶液过滤至样品瓶内，摇匀后，供液相色谱仪测定。过滤的样液取1L与1mL水混合后，供液相色谱-串联质谱仪测定。6.2测定6.2.1液相色谱条件6.2.1.1串联质谱法a)色谱柱：Mightysil RP-183m150mm4.6mm(内径)或相当者；b)流动相：甲醇十水(65十35)，用磷酸(4.2)调节流动相至pH=3:c)流速：0.3mL/mind)进样量：20L。6.2.1.2紫外检测法a)色谱柱：Mightysil RP-183m150mm4.6mm(内径)或相当者：b)流动相：甲醇十水(58十42)，用磷酸(4.2)调节流动相至pH=3:c)流速：0.7mL/min:d)检测波长：270nm:e)进样量：10L。6.2.2质谱条件a)扫描方式：正离子扫描：b)检测方式：多反应检测：c)电喷雾电压：4000V;d)雾化气压力：0.055MPa；c)气帘气压力：0.069MPa;D辅助气流速：6L/min:g)离子源温度：380C:h)去簇电压：100V,)定性离子对、定量离子对和碰撞气能量，见表1。表1八种黄酮化合物的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压名称定性离子对/(m/z)定量离子对/(m/z)碰撞气能量V芦丁611/303611/147611/303的杨梅酮319/153319/137319/15345槲皮素303/229303/152303/2294莰菲醇287/153237/134287/153公芹菜素271/153271/118271/15345松属素257/153257/131257/15335苛因255/153255/128255/15345高良差素271/153271/118271/15345GB/T19427-20036.2.3测定6.2.3.1液相色谱-串联质谱检测法测定用芦丁、杨梅酮、槲皮素、坎菲醇、芹菜素、松属素、苛因、高良姜素标准储备溶液配成的混合标准工作溶液(4.6)分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中芦丁、杨梅酮、槲皮素、坎菲醇、芹菜素、松属素、苛因、高良姜素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，芦丁、杨梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松属素、苛因、高良姜素的保留时间见表2。芦丁、杨梅酮、槲皮素、炎菲醇、芹莱素、松属素、苛因、高良姜素的总离子流图参见附录A中的图A.1。表2八种黄酮化合物的参考保留时间黄国化合物名称保留时间/min芦丁6.41杨梅闲7.66样皮素10.09莰菲醇14.18芹菜素15.25松属素24.56苛因29.92高良姜索36.196.2.3.2液相色谱紫外检测法测定根据试样溶液中每种黄酮化合物含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和试样溶液中每种黄酮化合物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。对标准工作溶液和试样溶液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，八种黄酮化合物出峰顺序和保留时间见表3。表3八种黄酮化合物的参考保留时间黄酮化合物名你保留时间/in芦丁3.326杨梅闺4.224静皮素6.367炎非醇10.007芹菜素10.810松属素19.118苛因24.022高良姜素30.377八种黄酮化合物标准物质的液相色谱图参见附录A中的图A,2。本方法的添加回收米数据参见附录B中的表B.1。6.3平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。6.4空白试验除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。